rna转染试剂(rna染色试剂)

虚拟屋 2022-12-14 19:38 编辑:admin 284阅读

1. rna染色试剂

DNA用甲基绿,RNA吡罗红醋酸洋红和龙胆紫是给染色体染色的

2. DNA染色试剂

DNA染色步骤如下:

1.提前一天细胞铺板

提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞密度在60%左右为宜。

2.转染过程

⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成DNA稀释液。

⑵将2μl的EntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释,充分混匀,制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。

⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中,充分混匀(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上),室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上,轻柔混匀。 注意:①对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加抗生素。

⑸培养4-6小时后更换培养基,继续培养24-48小时。 注意:①如细胞没有毒性等不良情况,转染后4-6小时可不必更换培养基。

3. RNA转染试剂

1、利用氯霉素抑制染色体的复制,而不抑制质粒的复制这一特点,在低拷贝质粒(如pUC19)的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。

2、RNA 的去除,首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A (100ug/ml),或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒,都可以降低 RNA 残留,但都不能彻底去除。

3、蛋白质的去除,主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间,可以形成更多的该不溶复合物,从而使蛋白质残留更少,但实践证明这样做并不是必须的,除非是大量抽提。 首先,质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取,可以根据实验的不同需求,选择相应的试剂盒。 质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。 而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素,获得的质粒可以用于细胞转染,常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同,可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。

4. 检验rna用什么染色剂

DNA用甲基绿染色,RNA用吡罗红染色。

  甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色.用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。

  脱氧核糖核酸(英语:Deoxyribonucleic acid,缩写为DNA)又称去氧核糖核酸,是一种分子,双链结构,由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运作。

5. rna的染色剂

5种常用DNA染液Relea

在许多选择中,这五个生物染料中是最常见的,首先是使用最广泛的溴化乙锭。 在进行此过程时,不仅要了解污渍之间的差异,而且要了解固有的健康风险,这一点很重要。

溴化乙锭

溴化乙锭可能是用于可视化DNA的最著名的染料。 它可以用于凝胶混合物,电泳缓冲液中,或在电泳后对凝胶染色。

染料的分子附着在DNA链上,并在紫外光下发出荧光,向您确切显示条带在凝胶中的位置。 尽管有其优点,但不利之处在于溴化乙锭是一种潜在的致癌物,因此必须谨慎处理。

SYBR Gold

SYBR Gold染料可用于对双链或单链DNA染色或对RNA染色。 SYBR Gold作为溴化乙锭的首批替代品之一进入市场,并被认为更加敏感。

一旦与核酸结合,该染料就会表现出1000倍的更大的UV荧光增强。 然后它会渗透到厚而高百分比的琼脂糖凝胶中,并可以用于甲醛凝胶中。

由于未结合分子的荧光非常低,因此不需要脱色。 自SYBR Gold推出以来,持有许可证的分子探针还开发并销售了SYBR Safe和SYBR Green,它们是溴化乙锭的更安全替代品。

SYBR Green

SYBR Green I和II染色剂(再次由Molecular Probes销售)针对不同目的进行了优化。 由于它们与DNA结合,因此仍被认为是潜在的诱变剂,因此,应谨慎处理。

SYBR Green I对双链DNA敏感,而SYBR Green II最适合与单链DNA或RNA结合使用。 像流行的溴化乙锭染料一样,这些高度敏感的染料在紫外线下会发出荧光。

推荐将SYBR Green I和II与“ 254 nm落射照明宝丽来667黑白胶片和SYBR Green凝胶染色照相滤光片”配合使用,以实现每100 pg RNA或单链DNA的检测带。

SYBR Safe

SYBR Safe被设计为是溴化乙锭和其他SYBR染料的更安全替代品。 它不被认为是有害废物,通常可以通过常规下水道系统(即下水道)进行处理,因为毒性测试表明没有急性毒性。

测试还表明,对叙利亚仓鼠胚胎(SHE)细胞,人淋巴细胞,小鼠淋巴瘤细胞几乎没有遗传毒性,或者在AMES测试中指出。 该染色剂可与蓝光透射照明器一起使用,这对可见的DNA造成的损伤较小,并为以后的克隆提供了更高的效率。

Eva Green

Eva Green是一种绿色荧光染料,已发现其抑制聚合酶链反应(PCR)的程度低于其他染料。 这对于定量实时PCR等应用非常有用。

如果要使用低熔点凝胶回收DNA,这也是一个不错的选择。 它在高温下非常稳定,单独具有很低的荧光,但是与DNA结合时却具有很高的荧光。 Eva Green还被证明具有极低的细胞毒性或致突变性。

6. dna和rna的染色试剂是什么

RNA的专用染色剂一般是吡啰红,因为吡啰红与RNA亲和性强(染完呈红色),而与DNA的亲和性弱;反之,甲基绿与DNA的亲和性强(染完呈绿色),而与RNA亲和性弱,故可以用吡啰红和甲基绿染液来染色观察细胞内RNA和DNA的分布情况

斐林试剂使用时,先反溶液和溶液混合(将滴溶液滴入溶液中),而后立即使用。。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。 所以两者的用法是相似的,即都是混合后使用。

7. RNA的染色

RNA的专用染色剂一般是吡啰红,因为吡啰红与RNA亲和性强(染完呈红色),而与DNA的亲和性弱;反之,甲基绿与DNA的亲和性强(染完呈绿色),而与RNA亲和性弱,故可以用吡啰红和甲基绿染液来染色观察细胞内RNA和DNA的分布情况

斐林试剂使用时,先反溶液和溶液混合(将滴溶液滴入溶液中),而后立即使用。。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。 所以两者的用法是相似的,即都是混合后使用。

8. rna的染色剂及颜色

吡罗红使RNA呈现红色,常用于检测细胞中RNA的分布,与甲基绿一起混用  甲基绿—派洛宁   (methyl green-pyronin)为碱性染料,它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与派洛宁作为混合染料时,甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色;派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用,同时两种核酸分子都是多聚体,而其聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色(但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色)。即RNA对派洛宁亲和力大,被染成红色,而DNA对甲基绿亲和力大,被染成绿色。

9. 染色dna和rna的实验中用到的药剂

DNA用甲基绿染色,RNA用吡罗红染色。 甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色.用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。

10. dna和rna染色剂

1。甲基绿和吡罗红:实验原理:甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布.

试剂及配制方法

(1)试剂 质量分数为0.9%的NaCl溶液,质量分数为8%的盐酸,乙酸钠,乙酸,蒸馏水,吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉,可以分别购买甲基绿和吡罗红G,然后按A液的第二种方法配制(见下文)。

(2)染色剂的配制

①染色剂A液的两种配制方法

第一种方法:取吡罗红甲基绿粉1 g,加入到100 mL蒸馏水中溶解,然后用滤纸过滤,将滤液放入棕色瓶中备用。

第二种方法:取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中,取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中,即为A液,放入棕色瓶中备用。(注意:用于核酸染色的是吡罗红G,请不要错买吡罗红B。)

②染色剂B液的配制方法 B液是一种缓冲液,由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4 g,用蒸馏水溶解至1 000 mL备用;再取乙酸12 mL,用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL,加蒸馏水50 mL,配成pH为4.8的B液(缓冲液)。

③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。

2。龙胆紫和醋酸洋红:

染色质(体)容易被碱性染料染成深色。作为染色剂必须具备两个条件:一是具有颜色;二是要与被染组织间有亲和力。染料的颜色和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的,产生颜色的发色基团和与组织间产生亲和力的助色基团共同决定了染色剂的染色性质。作为染料物质,除了有发色基团外,还需要有一种使化合物发生电离作用的助色基团。染色剂的酸、碱性界定并非由染料溶液的pH值决定,而是根据染料物质中助色基团电离后所带的电荷来决定。一般来说,助色基团带正电荷的染色剂为碱性染色剂,反之则为酸性染色剂。

醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。在煮沸的45%醋酸中加洋红使之饱和,再加入微量的铁离子,便使醋酸洋红材料在为醋酸固定的同时,

洋红将核或染色体染成红色。用龙胆紫可将染色体染成蓝紫色。

3。伊红美蓝:伊红和美蓝是两种苯胺类染料,可以抑制革兰氏阳性菌的生长。同时,这些染料可以区分那些发酵乳糖的微生物。大肠菌群因其强烈发酵乳糖而产生大量的混合酸,使菌体表面带上正电荷,可染上伊红染料,伊红与美蓝结合,菌体被着上深紫色,在含有两种染料呈紫色的培养基上,形成带核心、具金属光泽的菌落。因此可以用伊红和美蓝鉴别革兰氏阴性菌(大肠杆菌)的存在。

4。二苯胺:

二苯胺是一种非极性芳香族有机分子,有毒,熔点比水低,微溶解于水,易溶解于酒精、冰乙酸等有机溶剂。化学性质活泼,遇光易变色。因此要放置于暗处保存。

二苯胺试剂鉴定DNA的原理:DNA分子中的脱氧核糖在酸性环境下生成ω-羟基-γ-酮基戊醛,再与二苯胺试剂结合显蓝色,颜色的深浅与溶液中的DNA含量成正比。

二苯胺试剂的配制:A液:1.5克二苯胺溶解于100ml冰乙酸中,在加入1.5ml浓硫酸(此处浓硫酸的作用可能是作为强氧化剂来维持试剂的稳定),配制好的A液保存在棕色瓶中。B液:体积分数为0.2%的乙醛。由于乙醛是一种还原性试剂,所以实验前不能将A液和B液混合在一起。同时因为二苯胺试剂性质不稳定,极易变色,因此建议现配现用。

5。双缩脲:鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂,发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的铜离子与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)结构相似的肽键,所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应,可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。

6。斐林试剂:由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液,还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖)、果糖和麦芽糖)在加热的条件下,能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀

。因此,斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。

7.班氏试剂:

班氏试剂常用于尿糖的鉴定,其配方与斐林试剂不一样,其配方为:

①400ml水中加85g柠檬钠和50g无水碳酸钠;

②50ml加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成溶液;

③把溶液倒入柠檬酸钠溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。

(2)其反应原理与斐林试剂略有差别。利用斐林试剂鉴定时,斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生,与柠檬酸钠溶液和溶液混合时,结合,生成与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。

(3)两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈产生,很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠为一对缓冲物质,产生的数量有限,与溶液混合后产生的浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。

11. rna用什么试剂染色

盐酸:1.改变细胞膜的通透性,使染色剂进入细胞更容易

2.使DNA与蛋白质分离,有利于DNA于染色剂的结合

蒸馏水:蒸馏水的使用应为缓慢冲洗玻片上的细胞10秒钟,用于洗掉残留的盐酸