1. 质粒小量抽提试剂盒
不是260/230,是260/280,如果比值是1.7的话,那说明样品里面还有蛋白,有可能是菌体量太大,也可能和试剂盒质量有关系,一般质粒小抽的试剂盒产量都不是很高的,浓度有100ng/ul就不错了。
2. 提质粒的试剂盒
基因组DNA:基因组断裂是肯定的,主要是要抑制Dnase的活性.提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段,所以为保证DNA的完整性,各步操作均应较温和,避免剧烈震荡.
浓盐法提取时,为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.
苯酚抽提法提取时,苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.
试剂盒抽提的话,按照说明书上做就行了,一般不会有问题.
提质粒DNA:为了防止质粒断裂和基因组断裂混入最后提取的质粒中,在裂解这一步一定要轻,不能剧烈震荡.
大质粒(大于15kb) 容易受损,故应采用温和裂解法从细胞中释放出来.将细菌悬于蔗糖等渗溶液中,然后用溶菌酶和EDTA进生处理,破坏细胞壁和细胞外膜,再加入SDS一类去污剂溶解球形体.这种方法最大限度地减小了从具有正压的细菌内部把质粒释放出来所需要的作用力.
3. 质粒小提中量试剂盒
质粒抽提
质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
4. 质粒小量抽提试剂盒原理
提质粒的目的是去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
酶切的目的是对粘末端的DNA分子和载体分子进行切割,以获得相应的粘末端连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。
扩展资料:
1、提质粒原理
碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。
质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc/KAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
2、酶切基本原理
利用限制性内切酶对DNA上特定序列的识别,来确定切割位点并实现切割,从而获得所需的特定序列。
它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶,它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。
5. 质粒小量制备试剂盒
溶液1:50 mmol/L 葡萄糖,25 mmol/L Tris.Cl (pH8.0),10mmol/L EDTA (pH8.0)。葡萄糖增稠,使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部;EDTA 抑制DNase的活性
溶液2:碱液,目的在彻底破坏细胞膜,释放核酸。
溶液3:酸性钾盐溶液,目的是中和碱性并且沉淀SDS同时被沉淀的还有蛋白和大片段线性DNA
6. 质粒小提试剂盒
大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的,都是通过一定的方法(如加碱裂解)使在细菌内大量扩增的质粒释放出来,然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA,最终将DNA提取出来。
7. 质粒小量提取试剂盒各试剂作用
1、利用氯霉素抑制染色体的复制,而不抑制质粒的复制这一特点,在低拷贝质粒(如pUC19)的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。
2、RNA 的去除,首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A (100ug/ml),或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒,都可以降低 RNA 残留,但都不能彻底去除。
3、蛋白质的去除,主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间,可以形成更多的该不溶复合物,从而使蛋白质残留更少,但实践证明这样做并不是必须的,除非是大量抽提。 首先,质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取,可以根据实验的不同需求,选择相应的试剂盒。 质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。 而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素,获得的质粒可以用于细胞转染,常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同,可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。
8. 质粒浓缩试剂盒
原核细胞没有染色体,只是为了区别质粒DNA,而称为染色体DNA。
染色体一般指组蛋白和DNA结合形成的复合体。原核生物的DNA是裸露的,没有组蛋白与之结合。但是与基因表达和调控相关的蛋白依然会和DNA结合。
原核生物仍拥有细胞的基本构造并含有细胞质、细胞壁、细胞膜、以及鞭毛的细胞。细胞壁不包括所有的原核生物,原核生物有一个例外:原核生物中,除了支原体,其余的都有细胞壁;支原体是唯一不具有细胞壁的原核生物。
扩展资料:
原核细胞的细胞质膜功能:
原核细胞的细胞质膜是多功能的,其最重要的功能就是运输作用,包括营养物质的吸收、废物的排出、能量代谢等。细菌的细胞质膜往往会内陷折皱形成中膜体,具有类似线粒体的作用,故称为拟线粒体。
细菌质膜还参与遗传物质的复制和分配,因为细菌没有细胞核,所以细菌的DNA在复制时只能结合在质膜上,然后进行细胞的分裂。
参考资料来源: