pcr相关试剂(pcr相关试剂指)

虚拟屋 2022-12-16 16:04 编辑:admin 192阅读

1. pcr相关试剂指

qpcr和普通的PCR是一样的,需要buffer,dNTP,taq酶,引物,模板,水等 qpcr试剂盒是将buffer,dNTP,taq酶混在一起,还需要引物和模板。 如需设计引物,可以添加为青生物公众号,由专业人员提供免费的荧光定量PCR引物设计服务。

2. pcr试剂是什么

PCR检测试剂就是PCR的反应体系,经典PCR以DNA为模板,其体系组成以下几方面:1.原始模板:微生物检验中将待测样本中的细菌或病毒DNA,作为扩增反应的原始模板;

2.引物:两段单链寡核苷酸,其序列与代扩增片段的两端分别相同和互补,作为DNA合成反应的引物;

3.原料:4种脱氧核苷酸三磷酸作为DNA合成的原料;

4.DNA聚合酶:催化DNA合成;

5.合适的盐、缓冲液以及温度循环参数。

3. pcr体系中包含哪些试剂,各起什么作用

PCR试剂简单的理解就是用于做PCR的试剂。实际做PCR的试剂很多,在这儿可以理解为达到PCR级别的试剂。试剂中不应该存在对PCR反应有影响的杂质。象核酸、核酸酶,如果是水的话,盐离子尽可能的小,最好是超纯水。象一些盐类,分析纯的就可以达到要求。如果想做PCR,买点TAQ酶,dNTP就够了,引物找公司合成,模板自己提取。

4. 常用的荧光定量pcr试剂有哪些

有以下几种:

一,杂交捕获免疫荧光法,保存温度:2-30℃;

二,乳胶法,保存温度:4-30℃;

三,酶联免疫法,保存温度:2-8℃;

四,胶体金法,保存温度:2-30℃;

五,荧光PCR法,保存温度:-205℃;

六,化学发光法,保存温度:2-8℃;

七,双扩增法,保存温度:A盒-40到-15℃,B盒2-8℃;

八,RNA捕获探针法,保存温度:A盒2-8℃,B盒低于-15℃;

九,荧光免疫层析法,保存温度:4-30℃;

十,磁微粒化学发光法,保存温度:2-8℃;

十一,稀土纳米荧光免疫层析法,保存温度:2-30℃;

十二,上转发光免疫层析法,保存温度:2-30℃。

5. pcr实验中主要用到哪些试剂

这个得看,具体的pcr实验。

一般如果是基因组DNA当模板,一般50ul pcr体系用500ng基因组DNA。对于荧光定量pcr(qpcr),一般使用20ul体系,将1ug的rna,逆转成20ul体系的cDNA,进行pcr实验时,将逆转录的20ul体系样品稀释5倍,然后每个qpcr体系中加入4ul稀释后的cDNA(每孔的cDNA终浓度为40ng)。

6. pcr产物检测的方法是什么

乳液PCR是在PCR反应前,将包含PCR反应所有成分的水相与油相按一定比例混合,在一定转速搅拌力的作用下形成无数个大小相对均匀稳定且在油相中悬浮的小水滴,由于油相的阻隔,这些小水滴构成了独立的PCR反应空间,使每个乳液颗粒中的PCR反应能够独立进行而互不干扰,同时能有效的把干扰物和模板隔开,相当于无限稀释。

其最大特点是可以形成数目庞大的独立反应空间以进行DNA扩增,最理想的状态下每个小水滴中只含有一个DNA模板,因此小水滴中的PCR反应不会受到竞争干扰。但当目的片段的模板量较少时只有少量的乳液颗粒中有模板,如只有万分之一的乳液颗粒中有模板时,那么最后的产物总量只有常规PCR的万分之一,不能通过常规电泳等手段进行检测。

7. pcr诊断试剂

出现污染后,我们首先考虑可能是试剂的污染,更换新批号的HBV试剂重新检测后,结果仍为全部标本阳性。

将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测,结果标本中阴、阳性结果都有,阴性对照是阴性,阳性对照是阳性,说明标本没有被污染将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测,也显示试剂没有问题。我实验室用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉,再将HBV标本进行检测,结果全部标本仍然为阳性。

用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将HBV标本重新检测,同时设置了两个阴性对照(A和B),A阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿,打开反应管的盖子,在空气中暴露10min,盖上盖子,上机检测;B阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿,不开盖子,直接上机检测。

结果是全部标本和A阴性对照为阳性,而B阴性对照为阴性。至此,虽然还查找不到污染源是什么,但有一点可以肯定,PCR实验室污染是气溶胶扩散而引起的后来经过调查,发现污染是由于本室工一位工作人员在打扫实验室卫生时,用扩增区的扫笤和拖把打扫了标本制备区的卫生引起。

在确定了污染的原因后,我们就开始着手排除污染,每天都打开整个PCR实验室的门窗和排气扇,让整个实验室通风,用消毒液擦拭整个PCR实验室,打开所有的紫外灯照射。

每隔3d按3.5步骤检测一次,一直这样处理了一个月,A阴性对照才转为阴性。

连续检测三次A和B阴性对照,每次结果都均为阴性,才确定PCR实验室恢复正常。通常我们对PCR实验室污染的预防是采取隔离不同操作区、分装试剂、改进实验操作等规则,对污染的处理是用稀盐酸擦拭或浸泡;紫外线照射法等]。

而对于实验室的通风方面没有给予足够的重视,为了防止实验区间之间的相互污染,各个实验区间都是尽可能的密闭,从而使得实验室出现PCR产物残留污染的几率增大。从本次PCR实验室污染排除的过程来看.我觉得污染得以排除的一个关键是通风。

适当的给予实验室通风,可起到空气稀释的作用,有利于PCR产物残留量的减少,加快实验室污染的排除。

8. pcr主要仪器及试剂

目前核酸检测试剂常见的国产种类有这几种:

一,杂交捕获免疫荧光法,保存温度:2-30℃;

二,乳胶法,保存温度:4-30℃;

三,酶联免疫法,保存温度:2-8℃;

四,胶体金法,保存温度:2-30℃;

五,荧光PCR法,保存温度:-205℃;

六,化学发光法,保存温度:2-8℃;

七,双扩增法,保存温度:A盒-40到-15℃,B盒2-8℃;

八,RNA捕获探针法,保存温度:A盒2-8℃,B盒低于-15℃;

九,荧光免疫层析法,保存温度:4-30℃;

十,磁微粒化学发光法,保存温度:2-8℃;

十一,稀土纳米荧光免疫层析法,保存温度:2-30℃;

十二,上转发光免疫层析法,保存温度:2-30℃。

9. pcr的试剂包括哪些内容

如果你想做荧光定量PCR的根据实验思路来说应该需要一下试剂和仪器

1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水

2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop

3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。

4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。

5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。

10. 简述pcr每种试剂作用

一)试剂PCR仪

1.引物:决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同,选用不同引物,每种病原微生物都有自己特异的引物。

2.耐热的DNA聚合酶:此酶是从耐热细菌中分离出来的,能耐受高温90℃-100℃。

3.10×PCR缓冲液:500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl(pH8.4,20℃)150mmol/L MgCl2,1mg/ml明胶。10×PCR缓冲液随酶一起购买。

4.5mmol/L dNTP贮备液:将dATP、dCTP、dGTP和dTTP钠盐各100mg合并,加入灭菌去离子水溶解,用NaOH调pH至中性,分装每份300μl,-20℃保存。dNTP浓度用UV吸收法测定。现用dNTP溶液均有商品化产品。

5.DNA模板:用处理液将待测标本处理,不同处理方法、操作各异,但目的是暴露标本中被检测的DNA。

11. pcr常用试剂包括

pCR中的lC是指试剂盒的内标。

“新型冠状病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)”,试剂盒采用的内标(IC)为人类RNaseP基因(RP)。

在实验工作中,经常出现内标扩增曲线不出现典型“S”型或者内标完全无扩增曲线的情况,导致重复检测,拖延了报告发放时间,给临床诊疗工作带来不便。

在经过一系列实验之后,对试剂盒说明书中给出的实验方法进行了部分更改优化,经优化实验步骤后,内标的扩增曲线及起始循环Ct值均有明显改善。