染色试剂盒说明书(染色质提取试剂盒)

虚拟屋 2022-12-16 20:06 编辑:admin 188阅读

1. 染色质提取试剂盒

1、菲林试剂 还原糖 砖红色沉淀(需水域)

2、苏丹三 脂肪 橙红

3、苏丹四 脂肪 红

4、双缩脲 蛋白质 紫

5、龙胆紫 染色质 紫

6、碘 淀粉 蓝

7、健那绿 线粒体 绿

8、甲基绿 DNA 绿

9、吡罗红 RNA 红

10、溴麝香草酚蓝 CO2 由蓝变绿再变黄

11、重铬酸钾 酒精 酸性条件下由橙色变成灰绿

12、醋酸洋红(龙胆紫、改良苯酚品红) 染色质 红

13、台盼蓝 检验活死细胞 死细胞会被染成蓝色(不常用)

2. 荧光染色试剂盒

转染了GFP的细胞不能用FITC标记的Annexin V,因为FITC和GFP在流式细胞仪上是同一通道检测,无法区分,必须选用其他荧光素标记的Annexin V,比如APC、PE等。BD的凋亡检测试剂盒不错。

3. 染色质提取试剂盒图片

1、甲基绿和吡罗红两种染色剂 甲基绿使DNA呈现绿色;吡罗红使RNA呈现红色 2、盐酸 盐酸能够改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞,且使染色质中的DNA与蛋白质分离,有利于DNA与染色剂结合

4. 染色蛋白质试剂

检验还原糖:菲林试剂 砖红色检验蛋白质:双缩脲试剂 紫色检验脂肪:苏丹三 橘红色染色.活性细胞的线粒体 健那绿 绿色甲基绿染DNA绿色甲基橙染RNA红色.二苯胺检验DNA紫色

5. 染色质提取试剂盒怎么用

只要是碱性染料都可以让细胞核中的染色质着色。如:碱性品红、吉姆萨、瑞氏染液、结晶紫、龙胆紫、醋酸洋红、苏木精等等

6. 染色体提取试剂盒

一、实验原理

真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA(乙二胺四乙酸二钠)存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中,SDS可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离,EDTA则抑制细胞中Dnase的活性;而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸,使DNA分子完整地分离出来。

二、仪器及试剂

1. 仪器:

恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计(GeneQuant)、移液器、玻璃匀浆器、离心管(灭菌)、吸头(灭菌)

2. 试剂:

(1)细胞裂解缓冲液:

Tris (pH8.0) 100 mmol/L

EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L

NaCL 20 mmol/L

SDS 10%

胰RNA酶 20ug/ml

(2)蛋白酶K:称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中,?C20℃备用。

(3)TE缓冲液(pH 8.0):高压灭菌,室温贮存。

(4)酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)、

(5)异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。

三、操作步骤

1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3),尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中,加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块,转入1.5ml 离心管中,加入蛋白酶K (500ug/ml)20μl,混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37℃水浴12~24h,间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min,取上清液入另一离心管中。

2.加2倍体积异丙醇,倒转混匀后,可以看见丝状物,用100ul 吸头挑出,凉干,用200ul TE 重新溶解。(可进行PCR反应等,需要进一步纯化的按下列步骤进行)

3.加等量的酚:氯仿:异戊醇振荡混匀,离心12000 rpm,5min。

4.取上层溶液至另一管,加入等体积的氯仿?异戊醇,振荡混匀,离心12000 rpm,5min。

5. 取上层溶液至另一管,加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇,混匀后室温沉淀2min ,离心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次,离心12000 rpm , 5min。

8.小心倒掉上清液,将离心管倒置于吸水纸上,将附于管壁的残余液滴除掉,室温干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?C20℃保存备用。

10.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。

四、常见问题

1.选择的实验材料要新鲜,处理时间不易过长。

2.在加入细胞裂解缓冲液前,细胞必须均匀分散,以减少DNA团块形成。

3. 提取的DNA不易溶解:不纯,含杂质较多;加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥,也将使溶解变得很困难。

4. 电泳检测时DNA成涂布状:操作不慎;污染核酸酶等。

5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8;不纯,含有蛋白质等杂质。在这种情况下,应加入SDS至终浓度为0.5%,并重复步骤2~8。

6.酚/氯仿/异戊醇抽提后,其上清液太黏不易吸取:含高浓度的DNA,可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量。

7. 铁染色试剂盒

骨髓化验总体费用在400元左右。但是根据不同的疾病,检查的目的不同,费用可能略有不同。例如,怀疑缺铁性贫血的病人,骨髓还需要化验铁染色,总体费用可能在450左右。而如果怀疑是慢性白血病的病人,多数同时还需要做骨髓染色体,骨髓融合基因等检查,费用大体在2500元左右。如果是持续高热,原因不明的需要做骨髓培养,费用在800元左右。

8. 细胞膜染色试剂盒

台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。

健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较精确的定量分析。

9. 细菌染色试剂盒

Gimenez Staining:就是细菌的染色鉴定方法,染色成蓝色,不过用的在慢速和难培养的细菌,染色效果好试剂分为媒染剂和银染剂。

媒染液:10%单宁酸10 ml加5 ml饱和硫酸钾铝水溶液,再加1 ml苯胺饱和水溶液形成沉淀,通过摇动又能重新溶解,加入5%FeCl3水溶液1 ml形成黑色溶液,稳定10 min后使用。

银染液:配制5%AgNo3水溶液100 ml取出10 ml备用,再缓慢加入浓氨水(比重0.880)使形成的沉淀刚好重新溶解,最后把备用的10 mlAgNo3溶液向其中逐滴加入,直到摇动后呈现轻微而稳定的薄雾状溶液为止,避光保存,可稳定数周。用媒染液染片3~5min,蒸馏水充分洗涤后,再把银染液滴加至涂片上。加热至接近沸腾,染色3~5min。由于Rhodes镀银染色法媒染液成分复杂、操作繁锁

10. 染色质提取试剂盒原理

FeulgenReaction:福尔根反应(染色反应,可证明细胞中染色质的存在)具体的化学是:中等强度的酸进行的水解使脱氧核糖酸的醛基与schiffs试剂作用产生一种紫色。

11. 胶原染色试剂盒

he染色原理是易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性和嗜酸性。对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。

在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。