1. 转染试剂pei
区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter,terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话,需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。 真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的,可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒,外源基因整合到基因组中的,所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。 如果说载体的重组,没区别,都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。 表达的话,一般原核是直接转化细菌通过ISPG诱导进行表达,蛋白表达后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在,这种蛋白如果是真核基因来源,不一定拥有相应的蛋白生物活性,因为原核表达缺少真核转录后的蛋白修饰机制。但是原核表达的蛋白容易纯化,很容易获得纯化蛋白做为免疫原等进行使用。 而真核表达则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体, 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解,这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组,通过质粒上带的筛选标记,如G418等,通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性,因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。而不能用于纯化蛋白。 此外,真核表达还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统,其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒(特殊质粒,专用于杆状病毒表面展示系统)给昆虫细胞,然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞,来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组,获得目的基因,并且最终表达于病毒子的表面,所以成为表面展示系统。
2. 转染试剂pei配制
基于PEI转染的jetPRIME®是线性的聚乙烯亚胺衍生物,稳定的水溶性阳离子聚合物。它的原理是:
jetPRIME®包裹DNA形成阳离子复合物,该复合物与细胞表面带负电的蛋白聚糖相互作用吸附在细胞表面,通过内吞进入细胞,形成内含体。jetPRIME®具有质子海绵的作用,能够吸收溶酶体中的H+,质子的不断流入,导致复合体肿胀破裂,从而使外源DNA释放到细胞质中。
3. 转染试剂pei与DNA怎么混合
多胺和新一代转染介质: 多胺其实也是氨基多聚物, 原理无非基于吸附带负电的核酸形成非 共价结合的复合物,结合并穿越同样带负电的细胞膜。
瞬时转染是指将构建好的质粒通过某种方式导入到哺乳动物细胞内(主要指HEK293细胞),该质粒上的外源基因不整合到细胞自身的基因组上…
4. 转染试剂pei配好可以放-80吗
由于PEI 带正电荷,与带负电荷的DNA 结合形成带正电荷的 PEI-DNA 复合物,可以与带负电荷的细胞表面结合。
PEI-DNA 复合物通过胞吞作用进入细胞内部形成内涵体,之后一部分从内涵体中逃逸进入细胞核内,未逃逸的进入溶酶体被降解,无法入核的 DNA 会在 100 min 内被胞浆中的 DNA 酶降解
5. 转染试剂pei用pbs溶解
转染6孔板后,一般长到十的六次方级别就可以提蛋白了可以用移液器将细胞吸出来并高速离心,沉淀重悬于PBS中洗涤,接着就可以裂解提取蛋白了。可以用超声,酶解等等,裂解后离心收集上清。
6. 转染试剂配好后可以放多久
低温下保质期一年。
Lipo3000转染试剂中包含了先进的脂质体纳米颗粒技术,能够提供的转染性能,改善相关应用的结果及可重复性。
此试剂具有优异的转染效率,并可提高细胞活性,广泛适用于难转染的及常见的细胞种类(例如HEK293和Hela细胞)。在对生物学研究相关的广泛细胞种类实施成功转染的过程中,本试剂可:1、提供的性能——针对难以转染的细胞种类实现了高转染效率的试剂。
2、提高细胞活性——对细胞作用温和,毒性很低。3、功能多样——同时适用于DNA、RNA及共转染应用。