1. 免疫印迹试剂盒操作说明书
在化学发光免疫印迹中,底物是反应限制试剂,一旦其耗尽,光就会逐渐变弱并消失。
因此实验中一定要使用适当稀释浓度的抗体,才能在几小时内产生稳定的光信号输出,从而维持蛋白质检测的一致性和灵敏度。
当抗体没被足够稀释时,永远不会获得稳定的光信号输出。系统中太多的酶会快速氧化底物并终止信号。
2. 检测抗体试剂盒说明书
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武汉生命科技股份有限公司成立于2008年2月,注册资本2580万元。是国内专注于疫苗类抗体检测试剂盒研发、生产、销售于一体的国家级高新技术企业。建立起了完善的生产质量管理体系,产品体系覆盖酶联免疫,金标等多条生产线,拥有14个体外诊断试剂注册证,1项发明专利,13项实用新型专利,提供疫苗类抗体检测服务的专业第三方检测服务并提供专业的检测报告。
3. 免疫印迹法试剂盒
免疫印迹的条带位置代表目的蛋白分子量大小,显色条带灰度值(对比内参)代表目的蛋白的表达量。
4. 免疫组化试剂盒说明书
使用一些化学技术对抗原或抗体进行标记,制备出来的用于检测人体或动物样品(血液、唾液、尿液等)中一些疾病相关的标志物(抗体或抗原)的试剂盒。
由于在这些试剂盒均依据了抗原抗体的免疫反应,所以称之为免疫试剂盒。主要应用在临床诊断上或者一些机构的体检中。
5. 免疫印迹试剂盒操作说明书图片
NBT,中文名为氯化硝基四氮唑兰,是一种重要的体外诊断试剂原料,它是脱氢酶和其它过氧化酶的底物,也是碱性磷酸酶底物之一。
常用于免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)和蛋白印迹(WB)等实验。此外,NBT在化妆品领域也有着广泛的应用,比如检测化妆品成分中的超氧化物歧化酶(SOD)活性。
6. 免疫磁珠试剂盒说明书
“纳米”是物质的长度单位,等于十亿分之一米。物质小到纳米尺度时,它在电子学、光学、力学等方面可能表现出超越、乃至迥异于大尺度物质的特点。
纳米尺度使得原本色彩黯淡的物体在纳米尺度下会呈现五彩斑斓,轻如蝉翼的薄片会变得坚韧似钢,优良的导体会变成绝缘体,普通的材料会发电发光……
7. 放射免疫试剂盒说明书
是的。
医院里使用的放射性示踪剂属于非密封源,如碘-131、碘-125、锝-99m等。所谓的非密封源是指没有包壳的放射性物质。
8. 免疫检测试剂盒的原理
光激化学发光(Light Initiated Chemiluminescent Assay,LiCA)是一种均相免疫检测技术,属于化学发光技术之一。
该技术最初由Ullman等在1994年报道,美国德灵公司研发成功,后由PerkinElmer公司生产相关试剂(AlphaScreen),西门子公司生产出免疫诊断试剂(LOCI)。国产光激化学发光免疫检测系统由上海博阳公司建立在该技术之上。
光激化学发光(LiCA)的免疫反应属于均相反应模式,包被有抗体或抗原的感光珠与发光珠均匀分布在反应体系中,在分子作用力下自由运动,能更快速、充分的完成免疫反应,所以光激化学发光(LiCA)的免疫反应时间更短。
整个反应过程无需清洗和分离未结合的样本和试剂,降低了反应的系统误差,提高免疫反应的鲁棒性
从激发光→高能态氧离子→发光珠→光信号四个反应的信号传递过程具有放大效应,且发光迅速,保证了测定的敏感性,提高了结果的灵敏度。
整个能量(光)的产生、传递和放大过程十分稳定,不易受到pH值、离子强度和温度的影响。
9. 免疫印迹试剂盒操作说明书下载
电转印是蛋白免疫印迹中最常见的转印方法,即使用电场力驱动蛋白从凝胶中洗脱转移到膜上。此过程中,膜和凝胶放置在一起,并在两个电极之间放置滤纸。在电极之间施加电压,蛋白在电场力的作用下迁移到膜上。
电极之间产生的电场强度(以V / cm为单位测量)是实现转印的驱动力。电压及电极间距都会影响蛋白从凝胶中洗脱的速率。针对不同分子量的蛋白需要进行转印条件优化,以防止转印不足(蛋白不完全从凝胶中转移到膜上),或转印过度(蛋白穿透印迹膜造成损失)。
转膜流程:
1选择转印的方法及设备:可选择传统湿转、半干转或最新的快速半干转 方法。
2准备转印缓冲液及试剂:准备足够的转印缓冲液,用于转印槽以及凝胶、膜的预平衡。
3预平衡凝胶和膜:如有必要,用 转印缓冲液预先平衡凝胶和印迹膜。
4组装凝胶和膜的“三明治”:将凝胶和膜放置在被缓冲液浸湿的滤纸之间,做成转印“三明治”。
5转印过程:将“三明治”放入转印槽,并加入转印缓冲液,选择合适的转印条件,开始转印过程。
转印设备和过程主要有三种:
湿转系统,半干转系统和快速转印系统。
湿转系统
湿转系统适用于大多数各种分子量的常规蛋白转印。转印过程中凝胶和膜被浸入充满转印缓冲液的槽中。
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半干转系统
凝胶和膜被夹在预先润湿缓冲液的滤纸之间,滤纸与平板电极直接接触。半干转系统的安装使用比湿转简单。
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快速转印系统
快速转印系统是最近发展出来的技术,使用专用设备、专用滤纸及专用缓冲液来快速有效地转印蛋白。通常滤纸和湿润的膜预先放在一次性包装中,简化了转印“三明治”的组装。
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转印膜种类
硝化纤维素膜和增强型硝化纤维素膜
硝酸纤维素膜很容易在水或转印缓冲液中润湿,并且与多种蛋白检测方法兼容。无支持的硝化纤维素很脆,不建议用于抗体剥离及重孵育实验。增强型硝酸纤维素膜是含有惰性支撑结构的硝酸纤维素膜。这种额外的支撑使膜具有更高的强度和弹性,可以用于抗体剥离及重孵育,并可承受高压灭菌(121℃),依然保持硝酸纤维素的易润湿性。
聚偏二氟乙烯(PVDF)
PVDF 膜具有很强的蛋白结合能力(约为硝化纤维素的两倍),并且在通常的处理中不易破裂,因此可以用于抗体的剥离和重孵育实验。低荧光背景的PVDF膜结合了PVDF的优势,并且在很宽的波长范围内具有低自发荧光。在长时间曝光情况下,不会增加背景荧光水平,有利于检测微弱的荧光信号。
膜通常有两种孔径可供选择:
大多数免疫印迹实验,可使用孔径为0.45 μm 的膜
0.2 μm 孔径的膜适合转印低分子量蛋白 (<15,000 kD),低分子蛋白有可能穿过较大孔径的印迹膜
转印技巧
去除气泡
均匀的蛋白质转印需要三明治的各组件之间完全接触,尤其是凝胶和膜完全接触。气泡会导致膜上出现空白点,蛋白转印时会在气泡周围“流动”,因此请使用凝胶滚轮将这些气泡赶出!提示:梯度凝胶最好上下滚动,而不是左右滚动。左右滚动会导致梯度凝胶翘曲和起皱。
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转印前的预平衡
湿转和传统半干转时,将凝胶电泳缓冲液替换为转印缓冲液可获得更好的转印效果。电泳缓冲液的带入会增加电导率,从而导致转印过程中产生过多的热量。可在水中短暂冲洗凝胶,然后在转印缓冲液中平衡凝胶15分钟,平衡膜5分钟。请注意,对于某些快速转印系统,不建议使用凝胶预平衡,请遵循制造商的操作指南。
避免膜变干
在转印之前和之后均需保证膜的湿润,从转印三明治中取出后,转印热量会使膜容易变干燥。对于PVDF膜尤其重要,因为PVDF膜是疏水的。应迅速将膜浸入预先准备好的缓冲液中,以免膜干燥。如果干了,可将硝酸纤维素膜重新在缓冲液中浸湿,而PVDF膜则需要在醇中重新活化。
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