1. 测试大肠菌群所需要的试剂
检测程序:
1.测试方法:采用膜过滤测试法(采用滤膜为0.45um。
2.培养基和试剂
2.1伊红美蓝琼脂培养基(用于测试饮料成品中的大肠菌群)称取37.5g伊红美蓝琼脂培养基溶于1L蒸馏水中,加热溶解,121C15分钟高压灭菌。
2.2乳糖胆盐培养基配制方法(用于验证样品中的大肠菌群)称取35g乳糖胆盐培养基溶于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分别装于有倒立发酵管的试管中，115C，15分钟，高压灭菌。
2.3平板计数琼脂(用于测试成品茶饮料中的细菌总数)用电子称准确称取23.5g平板计数琼脂溶于1L蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,分装,121C15分钟高压灭菌。
2.4马铃薯葡萄糖琼脂(用于测试成品茶饮料中的霉/酵母菌)用电子称准确称取38g马铃薯葡萄糖琼脂溶于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装,121C15分钟高压灭菌。
2.5若培养基经过消毒后已凝固,使用之前需将装有培养基的瓶子放在微波炉进行溶解。
2. 大肠菌群检验中常用的抑菌剂有哪些
1.基础培养基（minimum media） 在一定条件下含有某类微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基,也称为基本培养基.
2.加富培养基（enriched media） 在普通培养基（如肉汤蛋白胨培养基）中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基.用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物. 这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等. 根据待分离微生物的特点设计的培养基,用于从环境中富集和分离某种微生物.（目的微生物在这种培养基中较其他微生物生长速度快,并逐渐富集而占优势,从而容易达到分离该种微生物的目的.）
3.选择性培养基（selected media） 一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基,具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能,广泛用于菌种筛选等领域. （1）利用该分离对象对某种营养物有一特殊“嗜好”的原理,专门在培养基中加入该营养物,把它制成一种加富性选择培养基（enriched selected media）,采用了这类“投其所好”的策略,就可使原先极少量的筛选对象很快在数量上接近或超过原试样中其他占优势的微生物,从而达到了富集或增殖（enrichment）的目的. （2）利用该分离对象对某种抑菌物质所特有的抗性,在筛选培养基中加入这种抑菌物质,经培养后,使原有试样中对此抑制剂表现敏感的优势菌生长大受抑制,原先处于劣势的分离对象大量增殖,最终在数量上占优势.通过这种“取其所抗”的办法也可达到富集培养的目的.这种培养基称为抑制性选择培养基（inhibited selected media）. 用作抑制它种微生物的选择性抑菌剂有染料(结晶紫等)、抗生素、脱氧胆酸钠和叠氮化钠等. 用于选择性的其他理化因素还有温度、氧、pH和渗透压等.
4.鉴别性培养基（differential media） 一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只需肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基. 用于鉴别不同类型微生物的培养基特定的化学反应,产生明显的特征性变化,根据这种特征性变化,可将该种微生物与其他微生物区分开来. 最常见的鉴别性培养基是伊红美蓝乳糖培养基,即EMB（Eosin Methylene Blue）培养基.它在饮用水、牛奶的大肠菌群数等细菌学检查和在 E.coli 的遗传学研究工作中有着重要的用途.
3. 大肠杆菌群的检测所用的试剂
渗透压是对于两侧水溶液浓度不同的半透膜，为了阻止水从低浓度一侧渗透到高浓度一侧而在高浓度一侧施加的最小额外压强称为渗透压。渗透压与溶液中不能通过半透膜的微粒数目和环境温度有关。
主要有疏水作用。
渗透压的疏水作用
排空效应是疏水作用（疏水力实质是熵和自由能的混合效应）的理想情况，而渗透压是使大分子产生这种排空力的原因。渗透压可以看成单位体积内的自由能变化。排空效应是小颗粒能把大颗粒推到一起，以使小颗粒自身的熵最大，如果两个表面精确匹配，则相应的单位接触面积上的自由能减少为ΔF/A=ckBT×2R，R 为小颗粒半径（这里的c不是浓度是分子数密度）。
小颗粒能够有效的帮助大分子找到彼此特异性识别位点，在生物学实验中，常用血清蛋白（BSA）和聚乙二醇（PEG）充当小颗粒，它们称为阻塞试剂。比如他们可以帮助脱氧血红蛋白和其他大蛋白粘在一起，溶解性降低10 倍；葡聚糖或PEG 能稳定复合物不受热分解，可以使DNA 溶解度增加若干；PEG 和BSA 还能使机动蛋白丝自组装速率或不同酶的活性增加几个数量级；在大肠杆菌DNA 复制系统中如果不加入阻塞试剂就不能工作。选择何种阻塞试剂并不重要，关键是他相对组装分子的尺度及数密度。这是无序状态过程中同时驱动的有序组装，这个的有序是以更小颗粒更大的无序为代价的。
4. 大肠菌群检测试剂
大肠菌群测定的操作细则 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1 设备和材料 1.1 温箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。
1.7 平皿:直径为90mm。
1.8 试管。
1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。
1.13 酒精灯。
1.14 试管架。
2 培养基和试剂 2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
3 操作步骤 3.1 检样稀释 3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
3.2 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。
每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3.3 分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
3.4 证实试验 在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
3.5 报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。
4 粪大肠菌群(faecal coliform) 4.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2 结果报告 根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。
若有较多典型大肠菌群菌落，革兰氏染色为阴性，即可直接判定为阳性。
若少或均不够典型，应多挑选菌落作证实实验，以免出现假阴性。
SN/T 1897-2007食品中菌落总数的测定也可以用于与食品接触的设备表面的。
附录A。
另有自定的 例一： 物体表面采样及检查方法 采样面积 被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
采样方法 用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于。
连续采样1～4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
培养（略）
5. 大肠菌群试剂盒
用牛肉膏蛋白胨培养基,普通的微生物培养中,细菌一般使用牛肉膏蛋白胨培养基,放线菌用高氏一号合成培养基,酵母菌用麦芽汁培养基,霉菌用查氏合成培养基
6. 测试大肠菌群所需要的试剂有哪些
一、东阿县御颜堂阿胶制品有限公司。该企业位于东阿县铜鱼路路西。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是原料验收记录不完整，部分原料未能提供随批合格检验报告，人参（人工种植）未提供采购记录且使用记录不全；二是车间及原辅料入口处防蝇设施不全，冷却间地面油污较多；三是缺少蛋白质检测设备和存放培养基的冰箱，大肠菌群测定用试剂使用不正确，出厂检验项目缺少蛋白质指标，缺少产品留样记录；四是销售台账记录不完整；五是现场未提供人员健康证明。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改。
二、山东东阿康倍阿胶生物科技有限公司。该企业位于东阿经济开发区霞光路东段路北（山东东海生物科技有限公司院内）。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是未索取部分原辅料供货者的许可证和产品合格证明，无进...要找的是这个吗？
2016年3月9日至10日，省食品药品监督管理局采取随机选派检查人员，随机确定生产企业的“双随机”方式，不发通知、不打招呼、不听汇报、直奔现场，对聊城市东阿县10家阿胶（阿胶糕）类食品生产企业进行了飞行检查。检查情况如下：
一、东阿县御颜堂阿胶制品有限公司。该企业位于东阿县铜鱼路路西。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是原料验收记录不完整，部分原料未能提供随批合格检验报告，人参（人工种植）未提供采购记录且使用记录不全；二是车间及原辅料入口处防蝇设施不全，冷却间地面油污较多；三是缺少蛋白质检测设备和存放培养基的冰箱，大肠菌群测定用试剂使用不正确，出厂检验项目缺少蛋白质指标，缺少产品留样记录；四是销售台账记录不完整；五是现场未提供人员健康证明。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改。
二、山东东阿康倍阿胶生物科技有限公司。该企业位于东阿经济开发区霞光路东段路北（山东东海生物科技有限公司院内）。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是未索取部分原辅料供货者的许可证和产品合格证明，无进货查验记录，无原辅料进出库记录；二是无原辅料配料、投料记录，无生产控制记录；三是不能提供与化验员签订的劳动合同，也未提供与有资质检验机构签订的出厂检验委托合同，同时成品出厂检验原始记录与结论不符；四是现场作业工人不能提供健康证；五是生产车间环境脏乱不整洁，洁具间存有拖把、抹布、水杯及杂物，配料间内放有螺丝，部分原辅料放在生产车间的其他功能间内，更衣间内存放的工作衣脏乱不清洁，洗手盆不清洁。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改，并对其立案调查。
三、东阿县延益堂阿胶制品有限公司。该企业位于东阿县铜鱼路北段路东铜城办事处南1000米（东阿县华星钢球有限公司院内）。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是生产布局不合理，原料核桃仁挑选工序设计在外包间内；二是未配备留样橱；三是未按照培训计划开展职工培训；四是包装库内无垫板。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改。
四、山东东阿一品堂阿胶生物有限公司。该企业位于东阿经济开发区鱼山路东霞光路北（东阿一诺新型建材有限公司院内）。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是黑芝麻、乳粉等原料贮存库房无防尘、防蝇设施，库房内有杂物、建筑材料；二是进货查验不齐全，部分原料未查验随批合格检验报告；三是厂区内有饲养家禽、家畜现象；四是化验室检验设备表面有灰尘。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改。
五、山东东阿修元阿胶生物集团有限公司。该企业位于东阿工业园区胶光路1号。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是冷库与切片间之间房间有一外开房门；二是配料表中未按照原辅料添加量顺序排列；三是部分原料使用的是食品级的阿胶晶，与企业标准不符。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改。
六、山东东阿古胶阿胶系列产品有限公司。该企业位于东阿县陈集乡驻地。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：阿胶糕标签特别强调添加了阿胶，但未标注其具体含量，且配料表中未按照原辅料添加量顺序排列。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改。
七、山东东阿胶城阿胶生物技术有限公司。该企业位于东阿县铜城镇工业园。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：生产车间内物品摆放不整齐，存有周转箱、拖把及杂物。
对飞行检查中发现的问题，检查组已于3月11日移交当地食品药品监管部门进行跟踪调查处理。当地食药监部门已责令该企业整改。
八、山东东阿益生堂阿胶保健食品有限公司。经飞行检查，该企业主要存在以下问题：一是记录方面。阿胶凝胶没有索取生产商的企业标准、出厂检验报告；阿胶冲剂批记录不完善；各工序操作记录无操作前与操作后的检查确认记录，无称量、物料平衡记录；阿胶片无擦胶工序操作记录。二是检验方面。半成品检验指标与工艺规程不相符；阿胶冲剂的型式检验报告缺少粗多糖一项；留样室没有保健食品专区且留样量不够；微生物检验室更衣室、缓冲间未作净化处理。三是过程控制方面。阿胶片与阿胶冲剂的工艺规程中无物料平衡计算。四是工艺布局和设备方面。空调机组的初效、中效过滤器无压差指示装置；生产操作期间未开净化空调机组；无纯化水处理设备；生产车间更衣室排水管不密封，二更缺少更衣柜，更衣服材质不符合要求；车间物料、待包装品传递通道存在交叉污染；洁净间的清洁工具有纤维脱落；洁净区各主要功能间无压差计、物料通道的压差计不全；粉碎间无集尘或捕尘设施；固体制剂无称量间、中间产品暂存间；阿胶冲剂无湿混设备。
7. 测试大肠菌群所需要的试剂是
“ATP荧光法细菌总数快速检测系统”简称“BL细菌快检仪”，由试剂组、微量荧光检测仪、样品预处理耗材三部件组成。
它是由本公司依据萤火虫发光原理研制；经国家有关部门鉴定；关键试剂、组成部件均立足于国内；具有自主知识产权；与美、英、日同类产品性能相同，价格只及其一半的第一款国产细菌快检设备。
可用于检测食品、饮料、原料乳中的细菌总数，也可供上述生产企业及检疫、环保、水政、海关等单位卫生监控使用，1-5分钟即能提供实时检测数据，并具备准确、便携、操作容易等特点,同时可以连接电脑,对数据进行储存%D%A应该3000到5000不等
8. 大肠菌群检测试剂盒使用方法
培养温度不足等等如果操作方法、培养基质量没有问题，那么久说明接种的水样品中不含有大肠菌群、培养时间不足，结果报告大肠菌群阴性或者未检出大肠菌群、接种时培养基太烫。 如果有问题，那么可能是培养基质量问题，这就需要根据实际情况查找原因了
9. 大肠杆菌用什么试剂
常用仪器：灭菌锅、恒温培养箱、鼓风干燥箱，冰箱，电子天平，均质器，菌落计数器，PH计，显微镜，超净工作台。产品名称无菌吸管、锥形瓶、玻璃培养皿、pH试纸、试管、烧杯、量筒、试管刷、洗耳球、试管架、均质袋、移液器，酒精灯、接种环。
10. 实验室大肠杆菌实验测定试剂
10倍稀释法是样液：稀释用水=1：9.你的的原样就是可以是1ml的这个浓度。
0.1ml的你可以从原样中吸取0.1ml样液，再加0.9ml无菌生理盐水。
0.01ml的就从稀释好的0.1ml浓度的稀释液中取0.1ml再加0.9生理盐水。
再要往下稀释的话，就从前一个稀释度的液体中取一份加9份生理盐水，总之就是比例是1:9。