1. 大肠杆菌的检验试剂
用牛肉膏蛋白胨培养基,普通的微生物培养中,细菌一般使用牛肉膏蛋白胨培养基,放线菌用高氏一号合成培养基,酵母菌用麦芽汁培养基,霉菌用查氏合成培养基
2. 大肠杆菌检测试剂
1、利用氯霉素抑制染色体的复制,而不抑制质粒的复制这一特点,在低拷贝质粒(如pUC19)的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。
2、RNA 的去除,首先是使用 RNase 消化。在溶液 I 中加入高浓度的 RNase A (100ug/ml),或者用含 25ug RNase A/ml TE 溶解抽提好的质粒,都可以降低 RNA 残留,但都不能彻底去除。
3、蛋白质的去除,主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间,可以形成更多的该不溶复合物,从而使蛋白质残留更少,但实践证明这样做并不是必须的,除非是大量抽提。 首先,质粒的提取可分为质粒小提、质粒中提、质粒大提。目前大多数实验室都选用试剂盒进行提取,可以根据实验的不同需求,选择相应的试剂盒。 质粒小提主要用于用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。 而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素,获得的质粒可以用于细胞转染,常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同,可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。
3. 实验室大肠杆菌实验测定试剂
“ATP荧光法细菌总数快速检测系统”简称“BL细菌快检仪”,由试剂组、微量荧光检测仪、样品预处理耗材三部件组成。
它是由本公司依据萤火虫发光原理研制;经国家有关部门鉴定;关键试剂、组成部件均立足于国内;具有自主知识产权;与美、英、日同类产品性能相同,价格只及其一半的第一款国产细菌快检设备。可用于检测食品、饮料、原料乳中的细菌总数,也可供上述生产企业及检疫、环保、水政、海关等单位卫生监控使用,1-5分钟即能提供实时检测数据,并具备准确、便携、操作容易等特点,同时可以连接电脑,对数据进行储存%D%A应该3000到5000不等
4. 对大肠杆菌有抑制作用的试剂
分子式:C8H17NaO3S
分子量:216.27
EINECS号:226-195-4
Mol文件号:5324-84-5.mol
1-辛烷磺酸钠 性质
熔点 :>300 °C(lit.)
沸点 :>300 °C(lit.)
储存条件 :Store at +5°C to +30°C.
溶解度 :H2O: soluble1M at 20°C, clear, colorless
形态:Crystalline Powder
颜色:White
PH值:5.5-7.5 (100g/l, H2O, 20℃)
酸碱指示剂变色ph值范围:5.5 - 7.5
水溶解性 :Soluble in water producing a clear and colorless solution.
最大波长(λmax):λ: 210 nm Amax: 0.08
λ: 220 nm Amax: 0.05
λ: 230 nm Amax: 0.03
λ: 260 nm Amax: 0.02
λ: 500 nm Amax: 0.02
BRN :3574241
稳定性:Stable. Incompatible with strong oxidizing agents.
InChIKey:HRQDCDQDOPSGBR-UHFFFAOYSA-M
CAS 数据库:5324-84-5(CAS DataBase Reference)
EPA化学物质信息:Sodium 1-octanesulfonate (5324-84-5)
1-辛烷磺酸钠 用途与合成方法
应用:
1-辛磺酸钠是一种非氟化的表面活性剂,对大肠杆菌具有潜在的杀菌作用。
用途 :
高压液相色谱离子缔合试剂,用于肽和蛋白质分析。制备抗静电聚酯纤维用中间体。表面活性剂。
用途 :
用于 HPLC 分析肽和蛋白质的离子对试剂.
5. 化学试剂对大肠杆菌的抑菌效果
1、木棉纤维:它有两端封闭的大中空结构,不利于厌氧菌的生存。其外壁含有一种天然的、苦味的物质,磨损过程中会脱落,使抗菌效果减弱。试验表明,木棉纤维对大肠杆菌具有明显的抑菌作用,且驱螨效果明显,达到87.54%,但对金葡菌则无明显作用。
2、壳聚糖纤维:这是甲壳素经浓碱处理后制成的纤维,对蛋白质具有很好的亲和性、无毒性,对各种细菌、真菌有较好的抗菌效果。
3、麻纤维:大麻纤维含有大麻酚类物质,具有抗菌性;且大麻是中空纤维,富含氧气,使得厌氧菌较难生存,类似于木棉。亚麻纤维有显著的抑菌作用,对绿脓杆菌、白色念珠菌等的抑菌率可达65%以上,对大肠杆菌和金葡菌的抑菌率超过90%。罗布麻纤维则对金葡菌、白色念珠菌等抑菌率在40%~60%,具有较好的抗菌性。
6. 大肠杆菌用什么试剂鉴定
常用仪器:灭菌锅、恒温培养箱、鼓风干燥箱,冰箱,电子天平,均质器,菌落计数器,PH计,显微镜,超净工作台。产品名称无菌吸管、锥形瓶、玻璃培养皿、pH试纸、试管、烧杯、量筒、试管刷、洗耳球、试管架、均质袋、移液器,酒精灯、接种环。
7. 药品大肠杆菌检测方法
取一定量的污泥,进行微生物培养,观察菌落数,菌落的数量就是改量的污泥中的大肠杆菌数量,不过需要多个平行性实验,确保准确性
8. 大肠杆菌的测定实验
因为一般常用作教学实验的微生物时大肠杆菌,其最大吸收波长为600 nm,故测定OD值时选择600 nm。 而不同微生物最佳吸收波长是不一样的,其他微生物的最佳吸收波长需实验来测定,即全波长扫描,测得该微生物的最大吸收波长,然后用于测定OD值。具体情况具体对待,并不是所有的微生物都是用的是600 nm。
9. 大肠杆菌检验试剂及现象
伊红和美蓝两种染料一酸一碱在培养基中为指示剂,对革兰氏阳性菌有抑制生长作用.当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽.而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落. 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落.金葡菌在此培养基上不生长.
10. 大肠杆菌检测试剂盒
如果说最基本的,当然是
载体、目的基因、宿主细胞和工具酶
恩,就这么简单,最基本的
如果你要实际操作的话,以质粒基因工程改造酵母菌为例(需要的设备材料用粗体标注):
首先移液管/移液器+无菌枪头
是必备物品
你需要含有质粒的细菌
(一般是大肠杆菌),将它在超净工作台
中接种在培养细菌的液体培养基
中(一般是LB培养基),在恒温摇瓶柜
里摇瓶培养到足够浓度,用质粒抽提盒(试剂盒)+离心机
将细菌溶解,沉降掉蛋白质、拟核和其他杂质,提取出来质粒,其中还需要使用60°C恒温鼓风箱和37°C恒温培养箱
,再用光度计
测质粒浓度。
将提取出来的质粒加入限制性核酸内切酶
以及Buffer(酶发挥活性所需环境缓冲液)
,置于37°C水浴锅
中保温,至于保温多久看多贵的酶了。
保温结束后,使用DNA柱回收试剂盒
和离心机将切好的质粒回收,去掉酶和其他东西。再加入用同样方法切割好的、具有相同黏性末端的目的基因
,DNA连接酶
和Buffer
,置于16°C培养箱
水浴培养,时间也是看酶多贵。
取细菌(大肠杆菌)制备感受态细菌
保存于-70°C冰箱
中,制备过程不赘述,其中需要使用冷冻离心机
。用同样方法柱回收连接产物并加入在冰上解冻的感受态细菌悬液中,42°C水浴锅
热击90秒再置于冰上,加入LB液体培养基并置于恒温摇瓶柜培养使细菌恢复生长。
制备含抗生素(一般是氨苄青霉素)的LB固体培养基
并倒在培养皿
中冷却,用涂布棒
将大肠杆菌涂到平板上倒置于37°C培养箱培养,筛选出转化成功含有氨苄抗性基因的大肠杆菌。挑取部分单菌落置于添加了Loading(染色剂)、热稳定DNA聚合酶、Buffer、dNTP、引物RNA
的PCR小管
中,在PCR仪
中扩增。
制备琼脂糖和TAE缓冲液配比并添加DNA染色剂(接触毒性)
做的核酸凝胶
,将PCR产物和Marker(条带大小的指示剂)
点样在凝胶中用核酸凝胶电泳仪
检测含有目的基因质粒的是哪一个菌落
确定是哪个菌落后,挑取该菌落接种在新的LB液体培养基中摇瓶培养,用同样的方法提取重组质粒,制备感受态酵母菌
并将重组质粒加入转化。
制备含抗生素(同上)的YPD固体培养基
并将转化产物涂布在平板上筛选,并进行PCR验证或进一步验证它的目的基因表达产物即可。基因工程的操作到这基本就算完了。
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如果是动植物细胞,也就是转化的方式有所不同,比使Ti质粒转座子、基因枪、显微注射、病毒侵染等。
以上是我们实验室的操作方法,实验室不同甚至预算不同都会引起方法有略微的差别。比如有一些繁琐的步骤只要买一个试剂盒就能解决,但是试剂盒也不便宜就是了。
如果你要了解,那这些基本够了
如果你要亲手实践一下,劝你还是联系实验室吧,毕竟这些东西就算土豪也肉疼……