1. 内毒素检验
1、对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节PH值。
2、酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
3、内毒素凝胶法或定量法。
2. 内毒素检验阳性说明什么
每套20EU。方法：样品稀释40倍，使用0.5EU/ml灵敏度的凝胶法鲎试剂做实验，如果结果是阳性，说明样品的内毒素大于20EU/ml，如果结果是阴性，则样品的内毒素小于20EU/ml。也可以使用定量方法，检测出具体的内毒素的值。
3. 内毒素检验规程
EU是内毒素的效价单位，即英文的Endotoxin Unit 的缩写。内毒素的单位现在国际上均以其活性单位EU表示，而80，90年代使用的重量单位pg已逐渐淘汰。因为内毒素的致病性是依靠其活性大小的，相同重量的内毒素由于其来源的菌种不同，采用的赋形剂及提取工艺不同，活性效价是不同的。 而鲎试剂的单位是以灵敏度EU/ml表示的。
4. 内毒素检验方法
实验技术如下：
1、显微镜使用，细菌抹片及革兰氏染色，细菌形态、结构的观察；
2、常用培养基的制备；
3、细菌的分离、培养、移植；
4、细菌在培养基中的生长表现及生理生化试验。
除此之外，微生物学的基本实验技术还有显微制片、沉降菌和浮游菌的采集及测定、内毒素检测、培养基的配制、菌种的培养与繁殖等
5. 内毒素检验的基本原理
鲎试剂是由海洋节肢动物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原，是从栖生于海洋的节肢动物"鲎"的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和(1,3)-β-葡聚糖。
目前，鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。
鲎的身上流淌着一种十分珍奇的血液。这种血液是淡蓝色的。这种淡蓝色的血液中含铜量很高，而且一遇到细菌就会凝固。利用鲎血液的这种特殊反应，对它进行处理，可以制成一种特殊的检验试剂——“鲎试剂”。鲎试剂可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品工业中，也可用它对毒素污染进行监测。
鲎试验的研究可以追溯到十九世纪八十年代左右，但是在1956年美国的约翰·霍普金斯大学动物学家F.Bang的一篇论文《鲎的一种细菌性疾病》发表后，人们才发现了鲎血液的实际医用价值。1965年，Dr.Bang与他的合作者制备了没有血液的鲎血细胞溶解物(LAL)，1968年便正式命名为鲎试验(Limulus Test)。
鲎试剂主要成分是鲎血细胞溶解物经氯仿处理去除了抗脂多糖因子，并加入适量二价钙、镁离子，含有C、B、G因子。[2]
因此，科学家认为血液呈淡蓝色的鲎在医学研究中有独特作用。用鲎血制成试剂，再滴入注射液，若试剂立即凝固或变色，就说明注射液内含有使人发热、休克甚至死亡的细菌内毒素。
此外，鲎为国家二级保护动物，我们呼吁政府和民间共同加强该“活化石”生物的保护。
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测和真菌（1,3)-β-D-葡聚糖检测。
鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。
6. 内毒素检验什么
革兰氏阴性菌，（如伤寒杆菌，痢疾杆菌等）的菌体中存在的毒性物质的总称。是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分，由菌体裂解后释出的毒素，又称之为“热原”。单位Eu/ml。其化学成分有磷脂多糖-蛋白质复合物，其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱，大致相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。内毒素耐热而稳定，抗原性弱。可刺激机体产生抗体，但无中和作用，形成抗毒素，经甲醛处理不能成为类毒素。
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。脂多糖对宿主是有毒性的。虽然内毒素紧密地嵌入细胞壁中，但也会不断地向周围环境释放内毒素，这种释放不仅仅是因为细胞的解体和死亡造成的，也会发生在正常细胞生长和分裂过程中。
内毒素不是蛋白质，因此非常耐热。在100℃的高温下加热1小时也不会被破坏，只有在160℃的温度下加热2到4个小时，或用强碱、强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。与外毒素不同之处在于：内毒素不能被稀甲醛溶液脱去毒性成为类毒素；把内毒素注射到机体内虽可产生一定量的特异免疫产物（称为抗体），但这种抗体抵消内毒素毒性的作用微弱。
中文名
内毒素
外文名
endotoxin
化学成分
脂多糖
毒性反应
发热反应 白细胞反应 内毒素休克
存在部位
细胞壁组分，菌裂解后释出
7. 内毒素检验 非洁净 飞检
主要有黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、伏马菌素、赭曲霉毒素。
目前来说检测的方法有液相色谱、酶联免疫、胶体金法、荧光定量法。
胶体金法相对来说操作比较简便，但是准确度不是特别高，液相色谱准确度高，但是操作复杂，需要专业的检测人员，费用高。
酶免的方法操作较为繁琐，需要集齐较多样本才能进行检测。目前我们公司用的是上海飞测生物荧光定量的仪器，检测一个样本只需要十几分钟，跟国标做过对比，吻合度比较高。
8. 内毒素检验环境
医用玻璃容器不仅需要彻底消毒与灭菌处理，还需要彻底清除细菌内毒素。在内毒素检测中，供试液制备质量是检测成功的关键。卫生部先后对玻璃注射器和一次性注射器产品细菌内毒素检测供试液制备方法作出具体规定和要求，但前后两种制备供试液的方法有差异，本实验对两种方法制备的供试液对细菌内毒素检测结果的影响进行了比较。
1、药品微生物检验的特殊性
2、增修订内容
1）明确规定了供试液制备时使用水浴加热的温度和加热时间（温度为不大于45摄氏度。
2）明确规定了供试液从制备完毕到加入培养基的时间应不超过1小时
3）对非水溶性供试品，增订了使用十四烷酸异丙酯溶解供试液方法。
4）删除了2000版收载的所有稀释剂，增订了其他四种，分别为PH7。 0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液、0。9%无菌氯化钠溶液和PH6。8无菌磷酸盐缓冲液以及PH7。6无菌磷酸盐缓冲盐
3、非水溶性供试品制备方法
十四烷酸异丙酯法
适用范围：用于一法不能溶解，可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油剂供试品
十四烷酸异丙酯的用量同方法验证试验（无菌十四烷酸异丙酯的制备采用薄膜过滤法过滤除菌，选用孔径为0。
22μm的脂溶性滤膜，在140度干热灭菌2小时）：无菌十四烷酸异丙酯，将购买的十四烷酸异丙酯用0。22
取供试品10g，加至含20ml 无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。
然后加入45度PH7。 0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml，振摇5~10min，萃取，静置使油水明显分层，取其水层为1：10的供试液
3、抑菌活性的供试品的拱试液制备方法。
1）、药物的抑（抗）菌作用
2）抑菌性药品检查的理由A、可逆性B、抗菌谱C、细菌的耐药性
3）抑菌药物判定：A、已知B、验证
5）制备方法
A、培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养机中使各单位体积内的供试品含量减少至不含抑菌作用减少，由于化学抑菌剂的抑菌效果与其浓度呈相关，即浓度越高，抑菌作用越强。
常用稀释法中和检品的抑菌性。不同抑菌性的浓度与其抑菌效力间的相关性不同，但对某一特定的抑菌剂来说，这种相关性是恒定不变的，二者呈指数关系，可用下式表示：
Gt=k
式中，C表示抑菌剂的浓度；t 表示杀灭标准试验菌所需要的时间；k是一个常数；浓度指数η，是lgt与lgC做图做得直线的斜率。
抑菌剂的η值越高，其抑菌作用越易。通过稀释而被中和掉，抑菌剂的η值越低则越难通过稀释法来中和消除其抑菌力。
本法适用抑菌作用不强的各类中西药制剂。
方法：取同稀释级的供试液2ml，每1ml等量分注5个平皿，倾注培养基混匀，培养计数，分别计算5个平皿的平均菌落数，计算每1ml供试品的平均菌落数，按计数规则报告菌数。
B、离心沉淀集菌法
1 ） 原理；利用质量和比量的不同
2）溶液剂及可溶于水的固体供试品：3000转/分离心20分，弃上留底液2ml。
3）难容于水的固体供试品：500转/分离心5分，弃上留底。
6）抑菌作用弱的固体供试品；也可一次低速离心取上层液直接入培养基。 。
9. 内毒素检验为什么不在无菌
用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，以达到无菌目的。所用的器具是含有微小孔径的滤菌器。主要用于血清、毒素、抗生素等不耐热生物制品及空气的除菌。常用的滤菌器有薄膜滤菌器(0.45μm和0.22μm孔径)、陶瓷滤菌器、石棉滤菌器、烧结玻璃滤菌器等。
10. 内毒素检验记录
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。鲎试剂因能与细菌内毒素及β-葡聚糖反应形成凝胶而被广泛用于检测食品、水源、药品、医疗器械、动物体液等不同样品中的内毒素。使用鲎试剂检测的试验称为鲎试验。
【原理】
鲎是一种海洋节肢动物，其血液及淋巴液中有一种有核的变形细胞，胞浆内有大量的致密颗粒，内含凝固酶及凝固蛋白原。当内毒素与鲎变形细胞冻融后的溶解物（鲎试剂）接触时，可激活凝固酶原，继而使可溶性的凝固蛋白原变成凝固蛋白而使鲎变形细胞冻融物呈凝胶状态。
检测内毒素血症的一种试验。鲎系海边栖生的一种大型节肢动物,属蜘蛛纲。其多功能血细胞(变形细胞)的溶解物中含有一种可凝性蛋白质,在极微量内毒素(0.0005vg/ml)存在时可形成凝胶。本试验即利用此原理测定血液或其他样品中的微量内毒素。在临床病例,下列疾病阳性率较高:内毒素性休克、急性化脓性胆管炎、重症肝炎、腹膜炎、肝硬化等。内毒素检出阳性病例中约有2/3导致死亡。
根据鲎试剂反应的原理可分为定性鲎试剂和定量鲎试剂，对应的试验称定性鲎试验和定量鲎试验。定性鲎试验主要用于药品，医疗器械等产品的内毒素定性检验。定量鲎试验主要用于检测临床病人、动物体内内毒素等方面，以便为医生用药提供参考。