1. 荧光定量pcr仪器参数设置
不同的仪器是不同的，ABI系列的仪器比较简单，在analysis中设置。
有些仪器好像是不能设置的
2. 荧光定量pcr仪器参数设置原则
不同的仪器是不同的，ABI系列的仪器比较简单，在analysis中设置。
有些仪器好像是不能设置的
3. 荧光定量pcr仪器参数设置方法
1目的 荧光定量PCR仪是复杂精密仪器，其校准工作需由专业工程师进行。除与仪器厂家达成协议定期校准以外，以实验判断仪器校准状态也可为何时进行仪器校准提供信息。 2范围 新购置、使用中、检修后的荧光定量PCR仪。 3校准用试剂 标准化荧光PCR试验试剂及102、103、104、106标准品。 4校准方法 4.1分析室内质控图，及时发现系统误差。经过分析排除了试剂和人员误差后，确定仪器是否出现了检测偏差需要校准。 4.2确定仪器需校准后，进行仪器状态效验试验 4.2.1准备标准化试剂及标准品 4.2.2在仪器处于校准状态下，用标准化试剂对102、103、104、106标准品进行扩增实验，分别计算标准曲线的斜率、截距、相关性的控制限。 4.2.3绘制标准曲线，观察标准曲线的三个参数是否处在控制范围和102标准品是否检出。 4.2.4当仅有102标准品未检出时，检查实验全过程。再次上机检测102标准品。 4.2.5当102标准品未检出、标准曲线的三个参数超出控制范围或仅出现后者时，先排除实验的人员、试剂因素，再重复实验。如结果依然，联系厂家立即进行仪器校准。
4. 荧光定量pcr仪校准规范
以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。根据反应体系是否设有参照物以及是否与标本在同一管中进行扩增，定量PCR可分为四种：
①有限稀释法，即倍比稀释法：通过稀释阳性样品直至靶基因不能再扩增为止，来设置已知浓度的参照品；根据阳性结果的最大稀释度及内参标或外参标的极限检出底线，计算出待检标本中原始模板的分子数；利用最大稀释度来进行标本核酸定量时的注意点。优点是不需要特殊设备，缺点是扩增反应条件要标准化，严格注意污染，避免假阳性的产生。
②使用外参照物的定量PCR，以已知浓度的目的基因为模板，按一定的倍比稀释，然后做出标准曲线图，未知的标本按这标准曲线找出对应的拷贝数。荧光定量PCR通常使用该法做标准曲线。
③使用非竞争性内参照物的定量：PCR反应条件同样，在同一试管内，用两对引物，同步扩增来自同一DNA的一段靶序列和另一段内标序列。通过比较两种序列的扩增产量可对靶序列定量。方法A、设计并合成PCR扩增靶基因及无关基因的引物，优化引物配比的条件。方法B、在指数增长期实现对靶基因及一系列已知含量无关基因的PCR扩增。方法C、PCR产物琼脂糖凝胶电泳，EB染色。方法D、电泳条带的紫外光下分析。方法E、二者荧光强度相等管的DNA含量亦相等。该方法只有当靶序列和内标序列以相同的量存在时，才能对两者相对定量；也是对处于扩增指数期的PCR产物定量。
④使用竞争性内参照物的定量PCR：同样的反应条件，同一个试管，用同一对引物，同步扩增靶序列和内参照序列。靶基因的量可通基本条件是靶序列和竞争性序列均用相同的引物以相同的效率扩增，两序列的初始化比值在整个反应过程中保持不变。目的DNA内参照DNA变性（同一对引物）PCR竞争性模板的设置：通过改变克隆的靶基因的序列来设计竞争性模板插入新的限制性酶切位点或使原来的酶切位点缺失通过基因重组技术插入一个与特异性蛋白结合的DNA片段，或者使靶序列发生定点诱变人工合成竞争性模板。竞争性模板设计目的：使其与靶基因的PCR扩增产物相区别（通过酶切、杂交、显色等手段实现）。常用的荧光定量为TaqMan探针技术，他特异的和目的片段结合，只是用的是TaqMan。半定量RT-PCR用做内参照，也应该是第三种，只是它是普通PCR，通过电泳的条带强弱，与GAPDH的比值，分析他们的灰度值半定量，个人认为数据不可靠，应该用TaqMan做相对定量或绝对定量。用rt-pcr比较两株细胞表达量的差异的时候，不一定要把两株细胞调整为相同浓度，因为要做内参照，可以校正模板量的差异
5. 荧光定量pcr数值大小
PCR原理中，反应一个循环，PCR产物扩增一倍，即为之前的2倍。……反应N个循环，理论上应为原来的2的N次方。此时，理论的扩增效率是100%，即1。但实际上，由于酶，dNTPs，引物，模板等因素，扩增效率达不到100%。因此，我们就要做标准曲线，看实际的扩增效率是多少，也就是标准曲线的斜率。理论上100%的扩增效率，换算出来的斜率是-3.32。
6. 荧光定量pcr检定规程
大致在200～600元
GBS即B族链球菌，GBS筛查是指对孕妇进行B族链球菌的筛查，通常在怀孕的35-37周进行，主要是为了避免B族链球菌对新生儿的危害。GBS筛查的方法主要包括细菌培养法、荧光定量PCR法等，临床应用更多的是后者。细菌培养法的价格约在100-150元，而荧光定量PCR法的价格约在200-500元。当然不同地区、不同医院收取的具体费用有所差异。
7. 荧光定量pcr仪器使用方法
荧光定量PCR法检测的是SYBR Green掺入到双链DNA中的量。SYBR Green掺入到双链DNA中后会发出荧光。但是只要是双链,它都掺。 而探针法是当探针结合到目标序列上以后,聚合酶降解探针后,探针上自带的荧光基团离开淬灭基团,从而发出荧光。