1. pcr仪器日常保养维护
pcr实验员的职责是：
1.完成核酸定量工作：负责实验室日常临检业务的处理，对核酸dna、rna进行提取，完成核酸定量工作；
2.维护保养实验室仪器设备：严格遵守实验室规定，对实验室仪器设备进行定期维护保养；
3.领用、保管耗材及试剂：依据实际工作需求，对实验室耗材及试剂进行领用与保管；
4.提交工作日志：及时提交工作日志，实验过程中出现的问题需及时记录并反映给上级；
2. pcr仪器维修
(1) PCR仪器需要定期检测，视制冷方式而定一般半年至少一次。
(2) PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的，当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1～2℃时，可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。
(3) PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制，要求越短越好，当PCR仪的降温过程超过60s，就应该检查仪器的制冷系统，对风冷制冷的PCR仪要较彻底地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。
(4) 一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时，不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件，必要时要请专业人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。
3. pcr仪器日常保养维护内容
第二次升温养护是为了： （1）减少因放松长张法预应力损失; （2）采用低水灰比，水泥用量的控制，选择级配良好的骨料，振动压实，以减少因混凝土收缩应力损失预蠕变; （3）使用的二次加热的维护，从而减少引起的预应力的损失的温度差。
4. pcr仪常见故障及维修
可能的原因和对应的解决方案如下：1.引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。2.循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。3.酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。4.退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 度为梯度设计梯度 PCR 反应优化退火温度。5.样品处理不当。6.Mg2+ 浓度偏高，因适当调整 Mg2+ 使用浓度。7.若为 PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。推荐使用engreen的PCR试剂盒，添加改良的DNA聚合酶，大大提高扩增产物的特异性和保真性。
5. pcr仪器保养和维护记录表
一、工作目标
动物产地检疫覆盖面达100%，产地检疫率达90%以上，病害动物无害化处理率达100%。屠宰场动物、动物产品检疫率达100%。
做到操作有规程，生产有记录，监管有责任人。规模养殖场、重点畜禽养殖大户规范率达100%。兽药生产销售使用环节及动物诊疗机构严格落实有关法律法规要求，规范运营。病死动物无害化处理监管覆盖面100%。
二、重点工作
（一）抓好非洲猪瘟防控。要强化疫情举报线索核查、外来生猪溯源排查；做好生猪运输车辆备案监管；强化生猪及其产品运输监管；督促养殖场业主落实生物安全措施，禁止使用餐厨剩余物或含猪血粉饲料喂猪；落实官方兽医驻场检疫和监督屠宰企业实施非洲猪瘟自检制度；严格执行生猪检疫规程和检疫政策；严格落实病死猪无害化处理监管；发现可疑疫情情况及时报告。
（二）严格规范产地检疫。严格执行动物检疫各项规程和有关规范性文件，特别是新修订的《生猪产地检疫规程》和《跨省调运种用乳用动物产地检疫规程》。进一步规范检疫申报、受理、现场检疫、畜禽标识查询、检疫记录、合格出证等行为，坚决杜绝“隔山开证”、不检疫就出证等违法违规行为发生。
一是要规范产地检疫受理条件、检疫行为和检疫证明的管理，落实非洲猪瘟防控期间制定的各项政策、规定和措施。二是要通过产地检疫环节规范规模养殖场行为，提升对规模养殖场管理水平，防止通过养殖场申报检疫使“洗猪”违法行为发生。三是要继续推广“兽医智慧云平台”使用，出证人员指导养殖场户等使用线上申报检疫。
（三）严格屠宰检疫。督导屠宰企业落实动物疫病防控和畜禽产品质量安全的主体责任。严格执行宰前和宰后检疫制度、巡监抽检等制度，规范检疫操作。强化对检疫不合格动物及有害动物产品无害化处理的监管。健全完善屠宰检疫各项工作记录实现痕迹化管理。
一是要强化生猪屠宰检疫，规范生猪屠宰检疫受理条件和驻场官方兽医屠宰检疫行为，官方兽医要履职尽责，倒逼屠宰企业落实主体责任和非洲猪瘟自检。二是监督定点屠宰点非洲猪瘟PCR检测过程、熟悉如何从PCR检测仪中读取数据和如何判定检测结果，防止屠宰企业篡改检测结果。
（四）强化跨省调运动物的检疫管理。加大对调运生猪及其车辆的查验。严格跨省引进种用、乳用动物以及种蛋、胚胎、精液的检疫审批，对种用乳用动物未达到健康标准或非种用乳用国家有特殊规定的，未按规定提供疫病检测报告的不得受理。跨省调出动物的检疫加强引进前防疫条件审查、疫情调查、疫病检测、风险评估和风险管控工作。严格落实跨省调入继续饲养动物的落地报告、隔离观察制度，切实做好后续监管工作。
一是严格跨省调运种、乳用动物审批，强化审批前的现场审核，严厉查处冒充商品畜禽调运逃避引种检疫审批等违法行为。种用乳用动物到达养殖场后，落实隔离观察规定。二是强化跨省调运动物的落地监管。严格落实养殖场跨省调运动物落地报告规定。对证物不符、目的地不符、未经指定通道调入等违规调运动物行为严格依法处理，高度重视对从布病高风险区引进肉牛饲养等违法行为的监管。三是加强入境生猪的监管，严防非洲猪瘟传入导致疫情发生。
（五）加强畜禽运输车辆备案管理。指定专人负责备案工作，力争全县生猪及其它畜禽运输车辆备案率达到100%。一是认真审核，严格把关。备案车辆必须具备规定条件才给予备案，不符合备案条件的车辆要求其进行整改。二是严格出证，倒逼备案。未备案车辆不得从事生猪（畜禽）运输，将车辆备案作为动物检疫合格证明出证的前置条件。三是实时监控，强化监管。实时查看（尤其是出具和收缴动物检疫合格证明时）其运输路线，重点查看是否超范围运输；实时抽查已备案车辆是否符合条件，对不符合条件的车辆及时注销其《生猪（畜禽）运输车辆备案表》。
（六）强化“瘦肉精”检测。贯彻落实省政府“办字〔2011〕79号”文件精神，加强宣传教育，做好出栏、屠宰环节“瘦肉精”监管工作。落实“瘦肉精”监督抽检制度，监督有关养殖场和定点屠宰企业落实“瘦肉精”自检制度，对发现“瘦肉精”疑似阳性的，要按规定上报、处理和移交，保障动物及动物产品安全。
1.强化主体责任。建立养殖户安全承诺制度和养殖场出栏自检制度，保证所销售的活畜不含有“瘦肉精”。督促屠宰场落实“瘦肉精”自检制度，开展进场自检和宰后抽检。
2.强化养殖场抽检。加强养殖场户的日常监督检查和“瘦肉精”抽检,不定期抽样检测存栏生猪、肉牛尿样和料槽料，强化生猪、肉牛出栏前的抽检。
3.强化屠宰场抽检。同时，要加强猪牛羊屠宰环节的“瘦肉精”监督检测，确保批批抽检。
（七）强化病死动物无害化处理管理。
1、支持病死畜禽无害化处理中心建设。生物科技有限公司专业无害化处理场，实施提档升级，进一步提升无害化处理运营水平。
2、严格落实无害化处理补助政策。病死猪无害化处理实行先处理后补助。我县按照补助资金拨付流程，加快预算执行进度，省级以上财政资金下达后，我县在3个月内将资金给付到位。
3、实行网格化管理，实现所有养殖场全覆盖监管，利用好省兽医智慧云平台及时做好病死畜禽的申报受理、现场查勘、收集处理等环节的审核监督。
（八）加强兽药生产经营使用的管理。一是加强常态化巡查监管力度。全面掌握监管对象基本情况和生产经营状况，通过双随机检查与日常监管相结合的方式，全面覆盖监管范围。将兽药抽检不合格、立案处罚及举报较多的企业列为重点监管对象，提高检查频次。二是加大对落实兽药GMP、GSP质量管理规范，落实兽药追溯制度及生产、经营假劣兽药，非法添加违禁物质和兽药使用等环节的检查，进一步加大对养殖环节兽药使用和休药期执行的检查力度，指导规范养殖场落实休药期制度，确保安全用药。督促指导兽用抗菌药使用减量化行动试点养殖企业的各项措施落实，完成年度目标。
（九）加强养殖场日常巡查。按照网格化管理要求，明确养殖场巡查责任人员，对辖区内的养殖场加大巡查力度，每月每个养殖场至少巡查1次。通过和养殖场负责人沟通、实地查看养殖场的动物防疫条件情况，查看防疫记录、用药记录、消毒记录、用料记录等养殖档案，对畜禽的调入、调出、存栏量、出栏量、饲养、用药、用料、免疫、消毒、检疫、病畜和粪便的无害化处理等情况进行细致的检查，严防重大动物疫病发生。认真填写巡查记录，建立巡查台账，发现问题，及时解决，及时上报。
（十）强力推进动物卫生监督信息系统应用。“互联网+”信息系统建设是提高动物卫生监督工作效能的有效手段，越来越多的监管工作纳入电子信息化管理。目前，我省已启动实施了动物、动物产品检疫；耳标订购、发放；生猪运输车辆备案监督；病死畜禽无害化处理监管等工作已纳入“兽医智慧云平台”管理。兽药经营环节纳入了“兽药二维码追溯系统”管理，今后可能要延伸至养殖场。动物疫苗订购、发放也纳入“省动物疫苗网络管理系统”管理。弄懂、会用这些系统、平台，是干好工作的最基本要求和一项基本技能，因此，我们每一名动物卫生监督人员要不断学习，勤于实践，适应社会发展的步伐。
6. pcr实验室常用仪器设备的操作维护校验和注意事项
1. 试剂准备阶段
试剂准备是 PCR 操作的第一个流程，需要在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行，用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。所有的 PCR 体系都应该在 - 20℃ 保存，除了 ddH 2 O 之外，其余的试剂组份需完全融化之后再加入，以免影响浓度。配制反应体系应在快速进行，以减少非特异性扩增。体系配制完成之后应马上进行 PCR 反应。
2. 样本制备阶段
样本制备是整个 PCR 反应中最为关键的环节，在接收样本时一定要确保样本的密封性以及样本编号的唯一性。严格遵守操作规程进行加样操作，操作时候尽量少说话或者不说话。
所有操作需要在生物安全柜内进行，操作前后生物安全柜需要进行紫外灯消毒，注意生物安全柜中物品的排放。戴手套并勤于更换，要有「无核酸观念」 。
3. 核酸扩增
在核酸扩增环节需要选择质量好的 Ep 管，装入反应体系的 EP 管上机前混匀、离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。在样本检测的同时设立对照（阳性对照、阴性对照、阴性模板、试剂对照）。同时严密检测 PCR 扩增仪的各项性能指标，其中对 PCR 扩增仪而言温度控制就意味着质量。
4. 产物分析
常见问题：
1）无 CT 值出现：模板量不足（杂质的引入及反复冻融的情况等）
2）CT 值出现过晚（大于 38）：各种反应成分的降解或加样量的不足
3）标准曲线线性相关性不佳：加样误差、标准品出现降解等
4）阴性对照有信号：模板有基因组的污染
5）扩增效率低：反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解、反应抑制
6）扩增曲线的异常：模板的浓度太高或荧光染料的降解
四、实验室操作环境的维护
1） 各工作区要有一定的隔离，进入工作区域应按照单一的方向进行。试剂贮存和准备区 → 标本制备区 → PCR 扩增区 → 产物分析区单一方向进行。
2） 各个区域实验用品专用：各个区域实验设备和物品应有明确的标记，不能混用。
3） 实验场所要保持通风良好，严格监测各个工作区的温湿度。
4）注意实验室污染的预防。
整个 PCR 实验的操作都需要特别注意避免污染，来自样本的、试剂的以及实验室各种气溶胶，要始终保持「无核酸观念」。
7. pcr扩增仪维护记录
PCR跑胶不亮说明PCR扩增效率低，需要找出原因并进行优化，获得高效扩增。
影响PCR扩增效率的因素很多，引物，模板，反应系统，聚合酶都有可能。目前一般实验室都采用PCR试剂盒，反应系统基本没有问题。
鉴于跑胶不亮判断是有扩增效率不高，因此可能是模板浓度过低或聚合酶活性偏低。建议提高模板浓度和酶的使用量。
8. pcr仪的维护与保养
PCR仪的 基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
3、引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链"，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
9. PCR仪使用注意事项
不可以暴晒，可以用吹风机吹干。
10. 荧光定量pcr仪维护保养
不需要预热。伯乐的这款荧光定量pcr仪直接将样品加上去之后就可以运行，无需预热。