pcr扩增仪器(Pcr扩增仪器)

虚拟屋 2022-12-15 18:00 编辑:admin 180阅读

1. Pcr扩增仪器

单纯的PCR技术只需要一种酶——TaqDNA聚合酶。

2. PCR扩增仪器天隆

不是。澳盛科技是专业从事碳纤维、芳纶等高性能纤维制品研发和生产的高科技公司。

公司座落在江苏省吴江市的澳利华工业园,占地165亩。公司以“C1”品牌行销碳纤维、芳纶等高性能纤维复合材料制品,产品主要包括以碳纤维、芳纶等高性能纤维为原料的各类编织物及预浸料,公司年生产碳纤维建筑加固补强180万平方米、预浸布200万平方米、芳纶帘子布150万平方米等,其它3K、6K碳纤维编织布100万平方米。

3. PCR扩增仪器价格

PCR有DNA-PCR和RNA-PCR两种,因为这里说的是原癌基因(DNA),所以这道题问的是DNA PCR扩增所需的物质,所以凡是和RNA PCR有关的就不用去选了(C、H)。

DNA扩增其实就是用游离的脱氧核苷酸在DNA聚合酶的催化下合成DNA长链,该过程类似于DNA复制,选项中没有模版(模版即要合成的目的原癌基因)一项,其实模版DNA也需要。合成时,所需的引物与模版的头端或尾端互补配对,然后在聚合酶的催化下游离的脱氧核苷酸在引物的基础上使模版的互补链不断延长,直至与模版完全等长。所以需要A、B、F三个,而D(转录)和E(翻译)与DNA合成没有关系。

4. PCR扩增仪器使用

pcr反应的扩增体系配置需要按照试剂说明书的规定严格配置才行,扩增体系里面有大量的酶,必需的离子,dntp等物质,如果随意改变比例,可能导致pcr扩增过程中突然停止,或者非特异性扩增,甚至出现假阳性,假阴性的情况。

所以,配置体系时就需要增加量时,就等比例的增加试剂量,并且不同批号的试剂不能随意混合使用。

5. PCR扩增仪器温度升不上去是什么原因

pcr温度过低只会导致反应体系中引物与DNA模板的非特异性结合,致使反应结果中出现大量非特异性结合条带。但是,你所需的产物也应该是包含在其中的,如果完全没有结果,说明你反应体系中其他步骤还存在问题,例如扩增时间等比较关键的步骤。

温度是由引物的GC%含量决定的,但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度(如Mg,Na等离子浓度)

6. PCR扩增仪器盖子没关上

PCR扩增DNA理论上在一定条件下是以2^n的几何级数增长,即每一次循环DNA数量会比前一次增加一倍。但是在一个固定的pcr反应体系中,pcr产物合成反应实际上是一个s形曲线。循环数与DNA合成关系为:

1.指数增长期及其以前,每一个循环数几乎都是成倍变化,即2^n;

2.指数增长期后期或平台期,每一个循环之间变化很小,甚至没有变化。

3.研究表明固定反应体系中,一般35循环就达到了峰值或平台期,最多不会超过40个循环。因此,如果小于35循环,减少循环数会成倍降低产量;如果大于35循环,改变循环数对产量影响不是特别显著。因此,常规pcr循环数一般为30~35。

7. pcr扩增实验仪器

简单来说不可以。

传统意义上的PCR就是使用DNA聚合酶进行对DNA体外扩增。这里面使用的是DNA聚合酶,酶的特异性是极高的,不可能扩增出RNA,即使核糖核苷酸和脱氧核糖核酸就差了一个氧原子。

PCR可以反转录之后扩增,RNA不能直接扩增,SAT技术RNA恒温扩增也是以DNA为模板大量转录RNA,扩增效率高达1000的n次方。

8. PCR扩增仪器人员配比

一种引物。

需要正反向引物各一条,即一对引物,有些特殊PCR需要多条引物。

pcr技术的基本原理类似于dna的自然复制过程,其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

pcr是一种体外dna扩增技术,它依赖于dna聚合酶在模板dna、引物和四种脱氧核苷酸存在下的酶促反应。待扩增的DNA片段及其两侧互补的寡核苷酸链引物通过“高温变性-低温退火-引物延伸”三步反复循环,使DNA片段的数量成倍增加,因此在短时间内,我们需要大量的特异性基因片段。

9. PCR扩增仪器的日常维护试题

PCR实验室污染原因有四个方面:

(一) 标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染

(二) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

(三) PCR扩增产物污染:因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml),远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。

还有一种可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;

(四) 实验室中克隆质粒的污染:

防止污染解决办法:

(一) 划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域内进行,PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行:

1. 试剂准备区。

2.标本制备区。

3. PCR扩增区及分析区。

(二) 分装试剂:PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中,不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA:

(三) 实验操作注意事项

尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:

1. 戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;

2. 使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;

3. 避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;

4. 操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;

5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管;

6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;

7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器。