流式细胞仪仪器(流式细胞仪仪器操作)

虚拟屋 2022-12-15 22:26 编辑:admin 105阅读

1. 流式细胞仪仪器操作

流式细胞仪(Flow cytometer )是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。

多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。

2. 流式细胞仪的使用方法

流式可以检测的样本很多:细胞表面的蛋白,通过荧光抗体直接标记细胞内部的蛋白,细胞固定,通透后再用荧光抗体识别细胞内部的DNA含量,细胞固定,通透后加DNA染料细胞内部钙离子浓度,直接加钙离子浓度荧光染料染色细胞内部线粒体膜电位,比如JC-1,罗丹明染料使用微球阵列,可以同时检测溶液中数十种可溶性蛋白的浓度

3. 流式细胞仪的操作

这个要看你的实验要求和样本的情况了。普通的样本,如果只是比较阳性细胞的百分率,而且目标细胞的数目比较多,那一般记录一万细胞就可以了。而在多重染色,而目标细胞是很罕见的细胞群,那就要记录数百万的events。另外,这个event,是全部event,还是设置单细胞群后的event也要根据情况来看。

4. 流式细胞仪方法

我简单说一下:

1. 首先,机器吸取细胞混悬液,射入由鞘液(一般都是磷酸盐缓冲液)。由于鞘液的流速大,所以细胞混悬液通过轴流的形式在中央,一般是单个细胞排队的形式。

2. 然后细胞通过检测窗口。有激光束照射。一般细胞都经过荧光染色,被激光照射后,会有不同波长的激发光产生。机器设有检测器来探测激发光的强弱3. 根据激发光的强弱,来判断细胞和染色物质的结合情况,从而得到要检测的结果(比如抗原量,DNA量,等等)

5. 流式细胞仪的原理及检测的基本方法

现代的流式细胞仪都可以同时测量10多个甚至更多的颜色。

已经不再使用FL1,FL2这样的名称了。而一些老式 的机器,由于装备的激光数量和检测器都很有限,比如BD calibur这款机器。最高配置也就是蓝色(488nm)和红色(647nm)两种激光。检测4种颜色(通道)。所以为方便起见,就命名为FL1,FL2, FL3和FL4。前三种由于蓝色激光,FL4用于检测红色激光所激发的荧光。其中FL1是检测绿色荧光的(比如FITC,荧光素或者绿色荧光蛋白),而FL2是检测橙色荧光的(比如PI染色)。

6. 流式细胞仪的操作流程

MFI可以有几个意思,比如MeanFluorescenceIntensity或者MedianFluorescenceIntensity。根据你样本的分布,如果样本是正态分布,平均荧光强度和中位荧光强度应该是一致的。但是在非正态分布的样本,这两个值是不一样的。具体用哪一个,要看具体样本的分布。

7. 流式细胞仪用法

激光在通过不同介质的物质时,方向会发生偏移,物理现象包括散射,反射,折射等等。

细胞通过激光束时,因为细胞和周围的液体的介质不同,所以光线的方向也会发生变化。由于激光正前方有一个阻挡装置,所以激光本身通过细胞后,不能再继续向前得到FSC的检测器。这时,细胞所折射出的光线,在一定的角度内(每个厂家所定制的角度不同)向前方得到FSC检测器。细胞的体积越大,可以向前方折射的光线就越多,FSC的信号就越强。而细胞内部的颗粒也可以对光线发生折射和反射,在和激光束为90度角的方向上进行检测,就是SSC的信号。细胞内部的颗粒折光性越强,SSC的信号机越强。

8. 流式细胞仪仪器操作规程

流式检测细胞周期操作步骤

1. 细胞培养: 取对数生长期的细胞,按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养,进行下一步的实验。

2. 细胞固定:800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4h以上。

3. 细胞染色: 1500rpm离心5min,弃上清,以3mL的PBS洗涤一次,加入400uL的CCAA溶液(PI染液,engreen),100ulRNase A(100ug/mL ),4℃避光孵育30min。

4. 流式分析:以标准程序用流式细胞仪检测,一般计数2~3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。

9. 流式细胞仪原理及应用

所谓的门,在流式细胞仪检测的时候术语叫做gate。流式细胞仪是针对细胞(后者颗粒)的群来做研究的。往往是先选中感兴趣的一个细胞群,再分析下一步的染色,可以进行很多分级。

比如先从所有细胞中画出淋巴细胞,可以在FSC-SSC散点图上画出淋巴细胞的群,比如一个方框,或者任意曲线的gate,也就是所谓的门。把淋巴细胞括在内。然后在另外一个散点图上只显示这个gate里的细胞,但是把横坐标和纵坐标改为其他荧光标记。总之,门就是一个选择细胞群的手段。

10. 流式细胞仪仪器操作视频

流式传输定义很广泛,主要指通过网络传送流媒体(如视频、音频)的技术总称。其特定含义为通过Internet 将影视节目传送到PC机。实现流式传输有两种方法:实时流式传输(Realtime streaming)和顺序流式传输(progressive streaming)。

一般说来,如视频为实时广播,或使用流式传输媒体服务器,或应用如RTSP的实时协议,即为实时流式传输。如使用HTTP服务器,文件即通过顺序流发送。采用哪种传输方法依赖你的需求。当然,流式文件也支持在播放前完全下载到硬盘。