酶促化学发光检仪器(酶标仪化学发光检测)

虚拟屋 2022-12-15 23:01 编辑:admin 139阅读

1. 酶标仪化学发光检测

hightop自测盒是潍坊康华生物技术有限公司的产品。

潍坊康华生物技术有限公司创建于1996年9月26日,位于山东省潍坊市经济技术开发区内,是专门从事体外诊断试剂、检验分析仪器等产品开发、生产、销售的高新技术企业。公司现有员工300多人,占地70多亩,建筑面积1万多平方米,拥有研发办公楼2座,GMP车间3座。

公司装备了世界一流的生产设备和科研仪器,由经验丰富的科学家和工程师组成精良扎实的研发队伍,产品生产过程严谨,质量管理体系完备。生产生化试剂、胶体金快速诊断试剂、酶联免疫试剂、化学发光试剂、干化学试纸、培养基及染色液等数百个品种的体外诊断试剂和化学发光仪、冰冻血浆融化箱、酶标仪、洗板机等检验仪器。

2. 化学发光仪和酶标仪的区别

发光法高,化学发光法检查更准确,化学发光法采用化学发光燃料进行测试的方法,灵敏度高分析方法简单快捷测检测时间短及诊断范围宽等优点相对比酶联法,化学发光法检测更准确。

3. 酶标仪 化学发光

AUTOBIO不是仪器名称,而是分析仪器公司(安图公司)公司的名称,该公司主要生产化学发光分析仪、酶标仪以及配套的洗板机等分析设备,同时生产相关的试剂;主要用于临床肿瘤、感染等的生物检查。AUTOBIO不是仪器名称,而是分析仪器公司(安图公司)公司的名称

4. 酶标仪激发光

光合作用三个阶段所用酶是不一样的。

光合作用的概念:光合作用(Photosynthesis),即光能合成作用,是植物、藻类和某些细菌,在可见光的照射下,经过光反应和暗反应,利用光合色素,将二氧化碳(或硫化氢)和水转化为有机物,将光能转化成化学能储存在有机物中,并释放出氧气(或氢气)的生化过程。

第一阶段:在类囊体薄膜上,水光解成为还原氢和氧气,ADP与Pi吸收能量结合生成ATP。

第二阶段:在叶绿体基质中,C₅结合CO₂生成两分子C₃。

第三阶段:在叶绿体基质中,ATP水解为ADP与Pi释放能量,C₃吸收能量并结合第一阶段中水生成的还原氢,生成糖类和C₅。

光反应阶段的特征是在光驱动下水分子氧化释放的电子通过类似于线粒体呼吸电子传递链那样的电子传递系统传递给NADP+,使它还原为NADPH。电子传递的另一结果是基质中质子被泵送到类囊体腔中,形成的跨膜质子梯度驱动ADP磷酸化生成ATP。

暗反应阶段是利用光反应生成NADPH和ATP进行碳的同化作用,使气体二氧化碳还原为糖。由于这阶段基本上不直接依赖于光,而只是依赖于NADPH和NADPH的提供。

扩展资料:

光合作用第二个阶段中的化学反应,没有光能也可以进行,这个阶段叫做暗反应阶段。暗反应阶段中的化学反应是在叶绿体内的基质中进行的。光反应阶段和暗反应阶段是一个整体,在光合作用的过程中,二者是紧密联系、缺一不可的。

光合作用为包括人类在内的几乎所有生物的生存提供了物质来源和能量来源。因此,光合作用对于人类和整个生物界都具有非常重要的意义。

当特殊叶绿素a对(P)被光激发后成为激发态P*,放出电子给原初电子受体(A)。叶绿素a被氧化成带正电荷(P+)的氧化态,而受体被还原成带负电荷的还原态(A-)。氧化态的叶绿素(P+)在失去电子后又可从次级电子供体(D)得到电子而恢复电子的还原态。

这样不断地氧化还原,原初电子受体将高能电子释放进入电子传递链,直至最终电子受体NADP+。同样,氧化态的电子供体(D+)也要想前面的供体夺取电子,一次直到最终的电子供体水。

5. 酶标仪测发光值

荧光酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。

荧光酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

目前,最有代表性的是从甲虫中分离得到的萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和从海肾中分离得到的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)。其中萤火虫荧光素酶作为报告基因反应目的基因表达的改变,肾荧光素酶作为内参基因,为实验提供统一基准线(减少内在变化因素如培养细胞的数目,细胞转染和裂解的效率对实验准确性的影响)。

6. 酶标仪测化学发光荧光素酶

虫荧光素酶 luciferase 亦称发光酶。是催化生物发光的酶系的总称。它是光物质的冷水抽提物在氧中发光时,底物虫荧光素被消耗以后残余的对热不稳定的高分子成分。现在对萤虫相海萤以及发光细菌的虫荧光素酶结晶物的研究得最多。它们属于加氧酶(oxygenase),不含金属和辅酶。对于发光,有的酶必须以ATP等作为辅助因子,有的则不需要。其发光机制等已了解到可因种的不同而有很大的差异,虫萤光素酶具有高度的特异性,一般仅作用于来自近缘种的虫荧光素。当然,萤虫、海萤的酶是不能互相代替引起发光的。海萤的虫荧光素酶在干燥状态下相当稳定,可以保存。

萤光生成反应通常分为以下两步:

1:萤光素 + ATP → 萤光素化腺苷酸(luciferyl adenylate) + PPi

2:萤光素化腺苷酸 + O2 → 氧萤光素 + AMP + 光

7. 酶标仪检测荧光

(1)原理:DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测 DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。

(2)材料与仪器

DCFH-DA购自Sigma公司,分子量487,用DMSO溶解,4.87 mg/ml 配成10 Mm,终浓度稀释成25µM; FLUOstarOPTIMA酶标仪。

(3)步骤

① 接种细胞:96孔板,接种细胞数为每孔1.5万个细胞。

② DCFH-DA孵育:接种24小时后用有糖earle’s 液洗两遍,并换上终浓度为25µM DCFH-DA培养箱孵育30 min.

③ 处理:DCFH-DA孵育结束后,用有糖earle’s 液洗两遍给予处理(氧化应激或药物)。

④ 检测:FLUOstarOPTIMA酶标仪检测荧光,488nm激发波长,525nm发射波长。

(4)注意点

① 要有无DCFH-DA孵育的对照;

② 多次清洗,注意操作规范,不要将细胞洗掉。

③ 如果处理4小时以内,可以先孵育荧光染料,再处理后检测;如果处理超过4小时,建议先处理,再孵育染料检测。

8. 酶标仪化学发光检测方法

1.原理:Ag+ + Cl- =AgCl (沉淀)

2.步骤:在被检测的溶液中先加入稀的稀HNO3溶液,排除离子的干扰,如OH-碳酸根等。

3.再滴加硝酸银溶液。

4.判断A,有白色沉淀,则溶液中有氯离子。

5.判断B,无白色沉淀,则溶液中没有氯离子。

CL免疫检测不但可以通过以CL分子直接标记抗原或抗体,也可以以CL底物标记可被检测的酶。

9. 酶标仪化学发光检测原理

萤火虫荧光素酶在氧气、ATP和镁离子同时存在的条件下,催化荧光素氧化,生成氧化荧光素,同时产生黄绿色光,波长540-600nm。

荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称。荧光素酶可以催化荧光素氧化成氧化荧光素,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

目前,最有代表性的是从甲虫中分离得到的萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和从海肾中分离得到的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)。