蛋白层析仪器系统(蛋白纯化分析仪)

虚拟屋 2022-12-16 02:31 编辑:admin 131阅读

1. 蛋白纯化分析仪

红外光谱仪是利用物质对不同波长的红外辐射的吸收特性,进行分子结构和化学组成分析的仪器。

红外光谱仪通常由光源,单色器,探测器和计算机处理信息系统组成。根据分光装置的不同,分为色散型和干涉型。

气相色谱仪是利用色谱分离技术和检测技术,对多组分的复杂混合物进行定性和定量分析的仪器。

通常可用于分析土壤中热稳定且沸点不超过500°C的有机物,如挥发性有机物、有机氯、有机磷、多环芳烃、酞酸酯等。

2. 蛋白纯化分析仪的曲线如何导出数据

  先用蛋白酶和肽酶处理得到氨基酸,然后用有机溶剂萃取,再进行分馏。

  一,植物中游离氨基酸的提取;

  1,烘干材料中游离氨基酸的提取:

  从植物的叶片、叶脉及种子中提取游离氨基酸一般先需要干燥处理,叶片、叶脉要在105~110摄氏度杀青,然后60~80摄氏度烘干、粉碎,过40目筛。一些研究者用75%或80%的酒精作溶剂从粉碎原料中提取氨基酸,也有用蒸馏水作萃取溶剂提取,提取的方法是常温或加热到一定温度(小于100摄氏度)用一定体积分数的萃取溶剂浸泡2~6h,或加热回流20~30min,为了使原料中的游离氨基酸尽可能得以溶解,提取过程需重复2~3次,然后合并提取液、过滤,蒸发掉乙醇,既得到了氨基酸粗提液。也有人采用蒸馏水作溶剂超声波提取提取的方法,或在室温下样品用50%乙醇浸泡微波萃取,然后离心过滤,若用氨基酸自动分析仪测定氨基酸的含量,常用2%~5%的磺基水杨酸水溶液浸提。

  2,鲜叶片或鲜果肉中游离氨基酸的提取:

  鲜叶片或鲜果肉中游离氨基酸的提取鲜叶片或鲜果肉一般用10%CH3COOH研磨或匀浆来进行提取,但由于鲜叶片或鲜果肉中的蛋白酶能水解蛋白质,造成游离氨基酸含量升高,故研磨要在冰浴中进行,新鲜材料中的脂、蛋白质、糖等易被提出,需加入一定的试剂除去。通常用10%三氯乙酸、一定浓度的醋酸铅、磺基水杨酸或95%乙醇加入过夜沉淀,然后离心或过滤的方法除去蛋白质,用乙酸乙酯或乙醚萃取以除去脂类等。

  二,游离氨基酸的纯化;

  从植物中提取的氨基酸粗提液中含有较多的色素、可溶性糖、有机酸及其他杂质,有必要对氨基酸粗提液进一步进行纯化,以便下一步进行氨基酸含量的测定。

  最常用的纯化方法是用732阳离子交换树脂进行纯化。

3. 进口蛋白纯化仪

  1、凝胶成像系统的原理?

  样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样,以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析,就可以确定它的成份和性质。

  样品对投射或者反射光有部分的吸收,从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度,通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。采用最新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀,最大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。

  2、凝胶成像的适用范围?

  1.蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析。

  2.可以确定生物分子的分子量。

  3.可以应用于生物分子的定量分析中。

  3、凝胶成像一般操作步骤?

  1.打开凝胶成像系统开关。

  2.打开电脑,系统自动打开并进入成像软件。

  3.打开凝胶成像系统前面板,选择使用紫外透射光源或者白光透射光源,将相应光源安放到位。

  4.将样品放置在透射光源的样品台上。

  5.在成像操作界面里面选择使用Upper white光源,点击绿色(即时成像)按钮。

  4、是不是像素越高,产品就越好?

  像素是要针对成像设备来看的,比如数码相机与CCD的像素就不具备可比性,其次CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCD最重要的指标是其大小,也就是CCD尺寸,尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。

  5、配件紫外反射灯源的主要用途为何?

  紫外反射灯源使用并不广泛,主要是提供非透明材质的DNA跑胶载体如纸层析等的成像需要而使用。由于比较常用的还是透明的琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶,透射光源完全可以满足,因此将紫外反射光源作为选配件不列入标配中。

  6、为何要采用自动变焦镜头,有何意义?

  自动变焦镜头无需手动调节,可操作性强,同时也减少了EB潜在的污染机会。再者使得将CCD内置成为了可能,从而达到防灰防尘防震的目的,更好地保护了核心部件延长产品的使用寿命。

  7、如何看待CCD的一些主要技术参数?

  CCD的主要技术参数有CCD尺寸,有效像素,信噪比,采集位数等。其中CCD尺寸与信噪比都是影响成像的关键因素,尺寸越大能接受的信号就越多。而热噪音越低,信噪比就越高,成像质量也就越好。采集位数指色彩灰度的表达范围。如采集位数为8则表示有2的8次方数量的灰度来还原色彩。

  8、紫外对人体有伤害,是否具有防护措施?

 紫外对人体,特别是眼睛有一定伤害,TOCAN凝胶成像系统具备紫外防护设施,在紫外灯开启的状态下,如不慎打开暗箱,紫外灯会自动熄灭防止对人体的伤害。

  9、能否在凝胶成像上直接切胶?

  TOCAN凝胶成像可以,如需直接切胶,首先按系统中间的观察窗,打开装有进口防紫外玻璃的观察窗口,然后打开左右两侧专为割胶所设计的小门,即可进行切胶操作。

  10、如何调节焦距 聚焦 光圈以获得高质量的图片?

  三个最重要的可调参数分别是焦距 聚焦和光圈。其中焦距调节清晰度,聚焦调节图像大小,光圈调节明暗。一般先把光圈调节到适宜的亮度后,再调节聚焦将图像放到最大,最后调解焦距,在图像较大的情况下焦距比较容易调节到最清晰状态,然后再把图像缩放在适宜大小后成像即可

4. 蛋白纯化分析仪原理

石英亚沸蒸馏是利用热辐射原理,保持液相温度低于沸点温度蒸发冷凝而制取高纯水。而一般的石英蒸馏器,因沸腾蒸馏,气中夹带水珠,气液分离不,致使水质不高;全玻璃蒸馏器,更因玻璃本身所含的污染,水质更差;离子交换水,又因有机物质的溶解带入有机物的**。石英亚沸蒸馏水器既避免了玻璃杂质的污染,又因液相温度低于沸点。不致因沸腾而在蒸气中夹带水珠。既气液分离。因此水质极高,经无焰原子吸收法分析无重金属检出

石英亚沸蒸馏的出水纯度:

① 金属杂质单项含量为:蒸馏水一次提纯~5PPb,多次提纯极限含量~5PP

② 电导牢:一次提纯O.08xl0-6Ω-1cm25’C 三次提纯0.059x10-6Ω-1cm25 ℃(参考值)

③加热功率:1000W—1500W

④电源:220V+-10 50Hz

石英亚沸高纯水蒸馏器(单重.双重.三重)产品特点:

石英亚沸高纯水蒸馏器(单重.双重.三重)用高纯石英为基材,以基于热辐射原理保持液相温度低于沸点温度蒸发冷凝而制取高纯水,较好地解决了汽液分离问题,与离子交换法,电渗析法,蒸馏法比较,水质纯度较高。原子吸收光谱分析仪,等离子光谱分析仪,UB-240型分光光度计,高压液相层析分析仪和极谱仪等对重金属元素Cu,Pb,Cd,Zn检测证明:用“蒸馏器”制取的高纯水符合目前较灵敏的痕量分析方法对水质的要求。在高压液相层梯度试验中,由重蒸去离子末能试验要求及UV-240型分光光度计以蒸馏水和去离子水一直末能解决

5. 蛋白纯化分析仪品牌

NGC蛋白纯化系统是一种用于生物学、水产学领域的科学仪器,于2016年10月10日启用。

兼容中高压层析柱/色谱柱的开放平台,配备可扩展系统泵,0.001-10 ml/min 或 0.01-100 ml/min 的系统泵;简单从分析性升级到中试制备级仪器,满足各种通量的要求。

6. 蛋白纯化仪器

最科普的参考书就是汪家政的蛋白质技术手册 其他的还有蛋白质纯化指南、蛋白质纯化与分析技术、蛋白质分离与纯化技术等等。

7. 蛋白纯化分析系统

AKTA蛋白纯化系统是一种用于农学、药学、生物学领域的分析仪器,于2016年5月1日启用。

8. 蛋白纯化分析仪使用方法

不知道你要什么规模的发酵呢,小试还是中试还是生产?

另外,你说的菌种选育里应该是包括了培养基配制和扩大培养啊。

所以,只能大概列下,你看下先。

菌种选育:超低温冰箱、无菌室、培养箱、摇床、分光光度计、检测设备。

培养基配制:电子天平、pH计、灭菌锅、微波炉、电磁炉、冰箱。

扩大再培养:灭菌锅、摇床、抽滤瓶(或特质金属瓶)、空调机组、臭氧发生器。

发酵:配料罐、种子罐、发酵罐、补料罐(小试用流加泵)、有时会用到在线监测设备如乙醇检测仪、生物传感器、分光光度计等、空压机、。

分离提纯:制水设备、制冷设备、浓缩机、细胞破碎仪、离心机、陶瓷膜、真空干燥设备、超低温冷干机、造粒设备(不同产品用到不同的烘干设备)等,不同工艺所用设备也不同,无法一一例举。

你可以看下下面这个网站,有比较多的设备。

9. 蛋白纯化分析仪国标

目的意义

DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质,它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用,是分子生物学和基因工程研究的对象,但无论是研究植物DNA的结构和功能,还是开展外源DNA的转化、转导的研究,首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。因此,本实验的目的是学习植物基因组DNA提取方法、原理和DNA的鉴定技术。

Ⅰ 植物基因组DNA 的提取(CTAB法)

一、原理

植物组织中绝大部分是核DNA,它和组蛋白、非组蛋白结合在一起,以核蛋白(即染色质或染色体)的形式存在于细胞核内。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵,hexadecyltrimethylammonium bromide,简称CTAB):是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的,当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开,然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中,再加入乙醇使核酸沉淀,CTAB能溶解于乙醇中。

在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题:

(1)DNA的二级结构和双链易受多种因素(如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等)的影响引起双链解开,即“变性”,因此抽提时避免使用变性的条件。

(2)抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀,它能把大分子的DNA切成碎片,所以要加以杜绝,现可以通过多种途径来做到这一点:a、低温操作;b、调节pH,使偏碱(pH8.0);c、抽提液中加表面活性剂;d、加螯合剂(EDTA)除去酶的铺助因子(Mg2+),使酶活性丧失。

(3)防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素,会使DNA降解,一般综合考虑,取pH8.0左右为宜。

(4)防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等,DNA分子特别大,其分子量可达1012道尔顿,极易被机械张力拉断,甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂,所以在抽提过程中要特别注意这一点,操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数,也不要剧烈摇动。

(5)植物的次生代谢物(主要是胞质内的多酚类或色素类化合物)对核酸提取有干扰作用。因此,一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取DNA的材料,这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少,DNA含量高,且易于破碎,植物材料最好是新鲜的。

分离提取植物DNA的方法很多,本实验采用CTAB法提取DNA并通过紫外吸收法和电泳鉴定。

二、操作方法

(1) 取200mg样品(在液氮中研磨成粉末状)放入1.5mL离心管中,加入600μL DNA提取液,颠倒混匀5-6次。65℃保温35分钟以上,其间颠倒混匀一次。

(2)再加等体积的氯仿异戊醇(24:1)溶液轻轻摇晃30秒,在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后,取吸上清液(450μL)

(3) 再加两倍体积的预冷异丙醇,混匀静止10分钟以上,在4℃下10000rpm/分钟离心10分钟后,弃上清。

(4) 用600μL70%乙醇洗涤沉淀,重复一次,在室温下倒置晾干。

(5)沉淀用TE溶液溶解DNA,再加入RNase至终浓度50μg/mL,在37℃下保温半小时,将DNA样品放入冰箱保存。

Ⅱ 植物DNA 纯度的鉴定——紫外分光光度计法

一、原理

由于核酸中的碱基都具有共轭双键,所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线,其吸收高峰在260nm处,吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处,所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一。但紫外法不能区分DNA和RNA,只能用来鉴定核酸的纯度和含量。

纯度鉴定时,需测定在230、260和280nm处的消光值,经验数据表明,

纯净的核酸溶液A260/A230的消光值比大于或等于2.0;A260/A280大于或等于1.80。A260/A280值过小,说明蛋白未脱净;A260/A230过小,说明有杂质(一般为多酚类或色素)。

含量测定时,对于纯净的DNA来说,在实际应用中可根据260nm处的消光值O.D260值换算成含量,一般认为O.D260值为1时,相当于50μg/ml。在测定核酸粗制品时,样品中残留的蛋白质和色素等与其它具紫外吸收的杂质对测定有明显干扰作用,大分子核酸制备过程中变性降解后有增色效应,因此有时此法测定的结果会高于定磷法。

二、实验材料、仪器及试剂

1、材料 植物DNA

2、器材:紫外分光光度计、移液管、试管

3、试剂:TE溶液(pH8.0)(见前述)

三、操作方法

将纯化的DNA溶液用TE(pH8.0)稀释至每毫升含5-50μg DNA浓度范围,用TE(pH8.0)作空白对照,于紫外分光光度计上测定260nm、280nm和230nm吸收值,计算A260/A230和A260/A280的比值,并换算出核酸的含量。

Ⅲ 植物DNA 分子量的测定——琼脂糖凝胶电泳法

一、原理

以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳广泛应用于核酸研究中,其操作简单、快速,是分离、鉴定、纯化DNA的标准方法。DNA分子在高于其等电点的pH溶液带负电荷,在电场中向正极移动。DNA分子在电场中通过凝胶介质而泳动,除电荷效应外,还有凝胶介质的分子筛效应,也就是说与分子大小构象有关。实验表明DNA迁移率与其分子量的对数成反比。因此通过参比已知标准分子量的DNA迁移率,可测定样品DNA的分子量。用低浓度的荧光物质,插入性染料溴化乙锭(EB)使凝胶中DNA区带染色,在紫外光下可直接显示DNA在凝胶中的位置,灵敏度很高,可检出10ng(10-9g)或更少的DNA含量。

二、实验材料、仪器及试剂

1、材料: 植物DNA

2、器材:水平板型电泳槽装置 电泳仪 254nm波长的紫外分析仪塑料手套 移液管 水浴锅

3、试剂:

(1)T ris-HAc(TAE)缓冲液

A.浓缩的贮备液(50倍)每升含:242gTris 57.1ml冰醋酸,100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)。

B.使用浓度:0.04mol/L Tris-HAc/0.04mol/L EDTA。

(2) 琼脂糖:电泳纯以上。

(3)溴酚蓝甘油溶液(0.05%溴酚蓝-50%甘油溶液):先配制0.1%溴酚蓝水溶液,然后取1份0.1%溴酚蓝溶液与等体积的甘油混合即成。

(4)已知分子量的标准DNA(λDNA-ECORI/Hind III)。

(5) 10mg/mL溴化乙锭水溶液(EB)或GV水溶液。

三、操作方法

1.琼脂糖凝胶板的制备

称取0.7g琼脂糖置于三角瓶中,加入100mlTAE缓冲液,在沸水浴中加热至琼脂糖完全溶解,冷却至50℃,然后加入EB溶液使终浓度为0.5μg/ml。倒入凹形有机玻璃槽(事先用胶带封住有机物玻璃板的边缘)。使其成2mm左右的凝胶板。在其未凝固前将样品槽模板(梳子)插入凝胶的一端,注意梳齿底与凝胶底之间应至少保持0.5-1.0mm的凝胶。待全部凝固后(室温,约30-45分钟),取出梳子及除去胶带,将凝胶板与玻璃板一起放入电泳槽内,加入TAE缓冲液使刚好超过凝胶面约1mm。

2.加样:将样品与溴酚蓝按4:1的比例混合,用移液器缓慢加入凝胶样品孔中,点样量为每孔5μgDNA。

3.电泳:点样端接负极,电泳开始时,可用较高的电压,如100伏特,这样可使样品很快进入胶内,而减少样品扩散,待样品进入胶内即可保持每厘米

5伏特左右的电压,DNA在电泳中向正极移动。当溴酚蓝的区带移至距凝胶底部1-2cm,停止电泳,当胶板为10-15cm的长度时,电泳时间一般为2小时左右。

(4)观察与鉴定

电泳结束后,取出凝胶板,在波长为254nm的凝胶成像系统下,观察电泳图谱,如果电泳条带清晰(如果EB染色看到桔黄色荧光条带,GV染色则看到绿色荧光条带),将凝胶照相。根据标准DNA的电泳图谱,可以得知样品DNA的分子大小。

10. 蛋白纯化分析仪的作用

离心机 天平

超速,高速冷冻,大容量,台式,其他 超微量,分析,精密,其它天平及附件

培养箱/干燥箱 植物生理生态

CO2/三气,低温,植物,生化,杂交,恒温/恒湿,厌氧,霉菌,烘箱/干燥箱,其他 植物生理,土壤/生态

同位素/发光检测 净化安全消毒

液闪仪,γ计数器,其他同位素,发光检测 超净台,生物安全柜, 消毒/灭菌器,安全防护

显微系统 转基因仪

生物,倒置,实体,电子/扫描探针,显微成像,微操纵,共聚焦,附件及其他/滤波片 转基因仪

电泳设备 生理/病理/药理/毒理

电泳仪,电泳槽,国产凝胶成像,进口凝胶成像 电生理仪器,膜片钳,脑立体定位仪,切片机,动物行为,动物实验仪器,动物活体成像

检验仪器 各类泵

酶标仪,洗板机,微生物,渗透压,其他检验仪器 恒流泵/蠕动泵,注射泵,真空泵及其它泵

PCR 超声波仪器

普通PCR, 梯度PCR, 定量PCR 清洗,破碎

紫外设备 生物芯片

透射/分析仪,紫外/核酸蛋白检测仪 生物芯片,点样仪,扫描仪,芯片分析软件

光谱/色谱/质谱/层析 样品处理

光谱/分光光度计,液相,气相,质谱,气体发生器 搅拌,匀浆,混合,研磨,均质,摇床/振荡,脱色摇床,移液工作站,核酸提取纯化,样品管理,收集器

低温/制冷/恒温 实验工具耗材

低温冰箱,液氮容器,冻干机,制冰机,恒温槽/水浴, 冷却水循环, 金属浴,其他温度设备/程序降温仪 移液器类,培养类,过滤层析和杂交,试管和离心管,其他实验耗材

理化分析 试剂

酸度计,离子计/电导计,粒度仪,旋光仪,其它理化分析/SPR 分子生物学,生化,细胞,血清/培养基,免疫/诊断检测,抗体,神经,标准品/对照品,食品检测,植物,动物,其他试剂

合成/测序/细胞分析/蛋白质组 实验动物/细胞株

DNA/有机/多肽合成,测序/基因分析,细胞分析,蛋白质组 实验动物,动物器具,细胞株/菌种

超滤超纯浓缩 实验室家具

纯水,超滤/微滤,浓缩仪,旋转蒸发仪 实验台,通风柜

发酵罐/细胞反应器 其它

国产发酵罐,进口发酵罐,细胞反应器,发酵罐配套设备 药检/制药,环境监测,食品饮料,图书,其它