1. 共聚焦多少细胞
你好的,你的标本是什么
一般体视显微镜都是看立体图像比较好的,10万以下可以拿下
高端的有共聚焦,可以获得细胞等三维图像,这个需要几百万
2. 共聚焦显微镜细胞准备
激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一。目前,激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究,并提供定量荧光测定
3. 一个共聚焦皿大概铺多少细胞
灰分Aad=m1/ m×100
挥发分 Vad=m1/ m×100-Mad
固定碳Fcad=100 - Mad - Vad -Aad
1、衡量煤中的灰分一般用到:原煤灰分和浮煤灰分两个概念。原煤、浮煤灰分用Ad%符号表示。我国煤中的灰分普遍较高,且变化也很大。灰分小于10%的特低灰煤全国仅约占探明储量的17%左右。
2、煤挥发分,以符号Vdaf(过去用Vr)表示。煤中有机质的可挥发的热分解产物。其中除含有氮、氢、甲烷、一氧化碳、二氧化碳和硫化氢等气体外,还有一些复杂的有机化合物。
3、煤的固定碳与挥发分一样,也是表征煤的变质程度的一个指标,随变质程度的增高而增高。所以一些国家以固定碳作为煤分类的一个指标。固定碳是煤的发热量的重要来源,所以有的国家以固定碳作为煤发热量计算的主要参数。固定碳也是合成氨用煤的一个重要指标。
固定碳的计算意义
(1)表征煤的煤化度。因Vdaf能反映煤的煤化度,故美国的煤分类中用FCdaf作为分类指标之一;
(2)氮肥厂用来选择无烟煤原料,无烟煤的FCdaf越髙,其造气过程中产生的一氧化碳和氧气越多,且煤的发热量高,生产合成氨时的煤耗低;
(3)计算煤的发热量。M.Goutal提出用固定碳计算媒发热量的经验公式。可近似计算各种煤发热量,非常简便;
(4)计算燃料比。固定碳与挥发分之比称为燃料比,用来表征高变质阶段的无烟煤非常灵敏。美国、曰本等用作无烟煤小类指标的划分。
4. 悬浮细胞共聚焦
悬浮细胞培养体系必备条件: ①悬浮培养物分散性好、细胞团小; ②细胞形状和大小大致相同; ③生长迅速。悬浮细胞倍增时间为2~3d甚至更短。可直接用悬浮细胞进行原生质体分离、杂交、次生代谢物生产等。
建立悬浮细胞系注意事项: ①合适外植体; ②疏松易碎愈伤组织; ③合适培养基; ④培养液除菌; ⑤暗或弱光悬浮培养; ⑥悬浮细胞继代与选择,保留小细胞团,直到得到均一的悬浮系为止。
植物细胞悬浮培养方法(1)分批培养(2)半连续培养(3)连续培养
5. 共聚焦倍数
物镜倍数乘以目镜倍数。(在你不用数码放大的情况下)
6. 共聚焦细胞密度
细胞分好几种,一般常用VERO细胞,正常工作传代代次不得超过150代,因此可以按你需要确定主代细胞及工作细胞代次,一般主代135代,工作代139代,可以更低。
一般冻存密度5000000~10000000个细胞/ml,每2ml冻存管加1.5ml
7. 共聚焦细胞浓度太大了
自然 的水中溶有微量的氧气,这个可以理解。鱼儿就是呼吸水中微量的溶解氧的。浓氧水就是人为使溶解氧浓度增大的水。
用途: 冶金工业 在炼钢过程中吹以高纯度氧气,氧便和碳及磷、硫、硅等起氧化反应,这不但降低了钢的含碳量,还有利于清除磷、硫、硅等杂质。而且氧化过程中产生的热量足以维持炼钢过程所需的温度,因此,吹氧不但缩短了冶炼时间,同时提高了钢的质量。高炉炼铁时,提高鼓风中的氧浓度可以降焦比,提高产量
8. 共聚焦皿种多少细胞
细胞在confocal皿中培养,细胞贴壁.因为培养皿中有培养液.如果用正置显微镜,镜头距离细胞较远,可能找不到细胞;要不镜头就得进入培养液中.所以用正置显微镜观察细胞不合适.当然如果你把培养液倒掉,那正置观察就没有问题了;或者用载玻片盖玻片封细胞都可以用正置来观察.否则就要用倒置更合适一些了.
9. 共聚焦固定细胞
一般共聚焦显微镜专用物镜的焦距都很短,只有10倍物镜的焦距可以直接透过96孔板的底部看到细胞。如果你想用更高倍数的物镜观察,必须使用特殊的96孔板,或者特殊的长工作距离物镜。我见别人用过一种底部是0.17mm厚度玻璃的96孔板,这个可以向几个细胞培养耗材生产商问问,长工作距离的物镜可以向共聚焦显微镜的生产商问,一般这个就比较贵了。
10. 悬浮细胞怎么看共聚焦
分散酶 Dispase中文名称为中性蛋白酶,也称为分散酶,是一种非特异性的金属蛋白酶,被用来从各种不同组织或器官中消化细胞外基质,释放并制备原代单细胞;或用于细胞培养中的细胞收获或接种转移;也被用于防止悬浮细胞培养时的细胞意外结团。
蛋白水解酶类,如胰蛋白酶、胶原酶和链酶蛋白酶都被用语来分散组织、分类细胞,但他们常伤害细胞,并且在培养时不稳定,甚至可能引入支原体污染。Dispase就没有这个问题,不会给细胞膜带来伤害,而且因为其来自细菌,故不会引入支原体或任何动物病毒;温度、pH、血清成分等的差异对Dispase影响很小。Dispase经稀释后其活性就大大降低,这也方便了后续的培养。Dispase甚至被加入细胞培养悬液中用于防止细胞团结。
11. 共聚焦皿细胞密度
基因克隆的基本步骤流程如下:
一、目的DNA片段的获得:
DNA克隆的第一步是获得包含目的基因在内的一群DNA分子,这些DNA分子或来自于目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA逆转录合成的双链 cDNA分子。
由于基因组DNA较大,不利于克隆,因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段,常用的方法有机械切割和核酸限制性内切酶消化。若是基因序列已知而且比较小就可用人工化学直接合成。如果基因的两端部分序列已知,根据已知序列设计引物,从基因组DNA 或cDNA中通过PCR技术可以获得目的基因。
二、载体的选择:
基因克隆常用的载体有:质粒载体、噬菌体载体、柯斯质粒载体、单链DNA噬菌体载体、噬粒载体及酵母人工染色体等。从总体上讲,根据载体的使用目的,载体可以分为克隆载体、表达载体、测序载体、穿梭载体等。
三、体外重组:
体外重组即体外将目的片断和载体分子连接的过程。大多数核酸限制性内切酶能够切割DNA分子形成有黏性末端,用同一种酶或同尾酶切割适当载体的多克隆位点便可获得相同的黏性末端,黏性末端彼此退火,通过T4 DNA连接酶的作用便可形成重组体,此为黏末端连接。
当目的DNA片断为平端,可以直接与带有平端载体相连,此为平末端连接,但连接效率比黏端相连差些。有时为了不同的克隆目的,如将平端DNA分子插入到带有黏末端的表达载体实现表达时,则要将平端DNA分子通过一些修饰;
如同聚物加尾,加衔接物或人工接头,PCR法引入酶切位点等,可以获得相应的黏末端,然后进行连接,此为修饰黏末端连接。
四、导入受体细胞:
载体DNA分子上具有能被原核宿主细胞识别的复制起始位点,因此可以在原核细胞如大肠杆菌中复制,重组载体中的目的基因随同载体一起被扩增,最终获得大量同一的重组DNA分子。
五、重组子的筛选:
从不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化子即阳性克隆的过程就是筛选。发展起来的成熟筛选方法如下:
(1)插入失活法:外源DNA片段插入到位于筛选标记基因(抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因)的多克隆位点后,会造成标记基因失活,表现出转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变,通过这些可以初步鉴定出转化子是重组子或非重组子。常用的是β-半乳糖苷酶显色法即蓝白筛选法(白色菌落是重组质粒)。
(2)PCR筛选和限制酶酶切法:提取转化子中的重组DNA分子作模板,根据目的基因已知的两端序列设计特异引物,通过PCR技术筛选阳性克隆。PCR法筛选出的阳性克隆,用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。
(3)核酸分子杂交法:制备目的基因特异的核酸探针,通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的克隆。目的基因特异的核酸探针可以是已获得的部分目的基因片段,或目的基因表达蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物种的同源基因。
(4)免疫学筛选法:获得目的基因表达的蛋白抗体,就可以采用免疫学筛选法获得目的基因克隆。这些抗体即可是从生物本身纯化出目的基因表达蛋白抗体,也可从目的基因部分ORF片段克隆在表达载体中获得表达蛋白的抗体。
扩展资料:
基因克隆的注意事项:
1、平端连接:DNA连接酶可催化相同和不同限制性核酸内切酶切割的平端之间的连接。原则上讲,限制酶切割DNA后产生的平端也属配伍末端,可彼此相互连接;若产生的粘性末端经特殊酶处理,使单链突出处被补齐或削平,变为平端,也可实行平端连接。
2、加尾连接:同聚物加尾连接是利用同聚物序列,如多聚A与多聚T之间的退火作用完成连接。在末端转移酶作用下,在DNA片段端制造出粘性末端,而后进行粘性末端连接。这是一种人工提高连接效率的方法,也属于粘性末端连接的一种特殊形式。
3、人工接头连接:对平端DNA片段或载体DNA,可在连接前将磷酸化的接头(linker)或适当分子连到平端,使产生新的限制性内切酶位点。再用识别新位点的限制性内切酶切除接头的远端,产生粘性末端。